检索历史 清除

摘要肾癌(RenalCellCarcinoma)是一种常见的泌尿系统恶性肿瘤。临床上治疗肾癌的一线药物为靶向VEGF/VEGFR和mTOR信号通路的激酶抑制剂。虽然这两类抑制剂能在一定程度上延长肾癌病人的无进展生存期，但对病人的总生存期却无显著提高，且不可避免地产生获得性耐药，从而大大限制了其疗效。因此，新靶点的寻找及新药物的开发成为肾癌治疗领域亟待解决的问题。本研究通过筛选FDA批准的激酶抑制剂发现，多靶点激酶抑制剂Dasatinib展现出最强的抑制肾癌细胞增殖效果。接着探究了Dasatinib在敏感肾癌细胞中的作用机制。首先，靶点干扰文库提示干扰激酶Src能够最显著抑制肾癌细胞的增殖，且回转SrcT341I突变体能显著逆转Dasatinib对肾癌细胞的增殖抑制作用，证实Src为Dasatinib在肾癌细胞中的主要靶点。其次，通过表达谱芯片寻找下游效应分子，发现Dasatinib靶向Src后可抑制转录激活因子YAP的转录活性;与此同时，YAP在肾癌中存在过度激活，且敲减YAP可抑制肾癌细胞增殖，而回转持续活化形式YAP-5SA显著可逆转Dasatinib对细胞的增殖抑制，证实YAP为关键下游效应分子。进一步，以激酶信号通路的小分子抑制剂为探针研究发现，JNK-LIMD1-LATS轴线是在肾癌细胞中介导Src调控YAP的重要信号传导通路。另外，Dasatinib能通过该条信号通路抑制敏感肾癌细胞在裸小鼠移植瘤中的生长。最后，本研究探索了下游效应分子YAP是否具有成为Dasatinib在肾癌中的疗效监控标志物的潜能。首先，Dasatinib处理后引起的p-YAP上调倍数与Dasatinib在肾癌细胞中的IC50值呈负相关，提示YAP可以指征Dasatinib在肾癌中的疗效。其次，通过浓度梯度法构建Dasatinib获得性耐药株，发现YAP对亲本和耐药细胞存活均十分关键，且Dasatinib不能再引起耐药细胞内p-YAP的上调，提示YAP可以监控Dasatinib获得性耐药的产生。再次，考察其他类型肿瘤细胞中Dasatinb敏感性与YAP的关系，发现Dasatinib无法上调不敏感细胞中的p-YAP，提示YAP在甄别Dasatinib原发性耐药过程中发挥一定功能。本研究具有重要的转化意义:一方面，Src-YAP信号通路影响肾癌细胞的存活，提示存在高度活化Src-YAP的肾癌病人可能是Dasatinib敏感群体;另一方面，YAP是Dasatinib在肾癌中发挥抗肿瘤作用的关键下游执行分子，具备成为Dasatinib疗效监控标志物的潜能。