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摘要目的:<br>　　1.通过对照观察桃仁膝康丸以及塞来昔布对K/LⅡ至Ⅳ级膝骨关节炎(KneeOsteoarthritis，KOA)的治疗效果，验证桃仁膝康丸的临床治疗作用。<br>　　2.通过前交叉韧带切断(AnteriorCruciateLigamentTransection，ACLT)法建立KOA大鼠模型，对大鼠进行灌药，证实桃仁膝康丸对大鼠膝关节软骨具有保护作用。<br>　　3.通过生物信息分析及网络药理学技术，筛选出桃仁膝康丸治疗OA可能的关键靶点和信号通路。<br>　　4.进一步通过IL-1β诱导大鼠膝关节软骨细胞，模拟软骨细胞OA样损伤，检测软骨细胞活性及凋亡，论证桃仁膝康丸可通过调控Wnt/β-catenin信号通路影响MMP13表达，从而保护关节软骨。<br>　　方法:<br>　　1.采用前瞻性随机对照研究，纳入K/L分级Ⅱ至Ⅳ期KOA患者共80例，按照数字表法，随机分为对照组和治疗组，每组各40例，脱落7人，本研究最终共纳入73例，对照组36例，治疗组37例。女59例，男14例，平均（63.68±8.25）岁，右膝34例，左膝39例，K/LⅡ级10人，Ⅲ级31人，Ⅳ级32人。两组患者在性别、年龄以及疾病严重程度的基线比较上，无统计学差异（P＞0.05）。对照组口服塞来昔布，治疗组口服桃仁膝康丸，连续治疗6周后。观察两组治疗前后VAS评分、WOMAC膝关节功能评分、中医证候疗效判定以及不良事件发生率等。<br>　　2.通过ACLT法切断大鼠膝关节前交叉韧带，建立KOA大鼠模型。验证模型后，将40只大鼠随机分为假手术组(n=10)、模型组(n=10)、中药标准剂量组(n=10)、中药低剂量组(n=10)。假手术组仅切开皮肤作为对照，后三组制作模型后，分别给予10ml/kg蒸馏水、1.25g/kg/d桃仁膝康丸药液、0.625g/kg/d桃仁膝康丸药液灌胃，术后干预6周后观察大鼠LequesneMG行为学评分，处死大鼠，解剖膝关节，对膝关节软骨大体外观进行评分，再将膝关节组织切片、染色，进行OARSI-ModifiedMankin评分。<br>　　3.通过GEO数据库提取GSE1919数据集（基于GPL91平台）的芯片数据，纳入5个正常捐赠者和5个OA患者信息，利用R语言对矩阵文件进行数据矫正和归一化等处理、计算正常捐赠组和OA组的差异表达基因，以调整P(P.adj)＜0.05及|log2FC|≥1为筛选差异基因的标准，从而得到OA差异表达基因(DifferentiallyexpressedGenes，DEGs)。并绘制火山图和热图。将DEGs导入DAVID数据库，得到GO和KEGG富集分析结果。通过TCMSP检索桃仁膝康丸的活性成分，以OB≥30％和DL≥0.18为筛选条件，将得到的靶蛋白导入Uniprot数据库比对，通过GeneCards数据库和OMIM数据库中筛选与人类OA相关基因，应用Uniprot数据库对疾病靶基因进行矫正，将所获得基因与桃仁膝康丸的活性成分作用靶点进行比对，导入Cytoscape3.9.1，并构建药物-活性成分-靶基因网络图。将OA疾病靶点、桃仁膝康丸药物靶点及差异表达基因，导入Venny2.1绘制韦恩图。将桃仁膝康丸-OA相关基因导入String，物种选择“HomoSapiens”，设定最低相互作用阀值为“Highconfidence”，获得PPI网络。将网络导入Cytoscape3.9.1中，得到桃仁膝康丸-OA表达互作网络模型，对PPI网络中节点进行拓扑分析，筛选关键靶点。<br>　　4.分离大鼠软骨细胞，进行形态学观察及软骨细胞标志物Ⅱ型胶原蛋白和转录因子SOX9免疫组化鉴定，含药血清干预正常软骨细胞和IL-1β诱导的OA损伤软骨细胞，通过CCK-8法对软骨细胞进行活性测定，流式细胞术进一步检测细胞凋亡，qRT-PCR以及WesternBlot检测Wnt/β-catenin通路相关蛋白和基因表达β-catenin、GSK3β、SOX9，以及下游软骨基质水解酶MMP13和软骨标志物COL2表达。<br>　　结论:<br>　　1.桃仁膝康丸与塞来昔布均可以有效治疗肝肾亏虚型KOA，塞来昔布在急性疼痛控制方面效果更优，在停药2周后，两种治疗方式效果相当，安全性相当，但桃仁膝康丸可以有效兼顾肝肾亏虚型KOA的次症，塞来昔布无此作用。<br>　　2.本研究通过动物实验发现桃仁膝康丸可以减缓KOA大鼠软骨破坏速度，具有保护软骨作用。<br>　　3.桃仁膝康丸治疗OA是通过多种成分、多个靶点、多种作用途径而达到治疗作用的，Wnt/β-catenin和MMP13可能是作用靶点。<br>　　4.通过体外研究实验发现桃仁膝康丸含药血清可以通过下调Wnt/β-catenin信号通路，降低MMP13表达，从而保护软骨。