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摘要目的:<br>　　探讨热休克蛋白90(HSP90)是否通过调控相互作用蛋白1(RIP1)/相互作用蛋白3(RIP3)/混合系激酶区域样蛋白(MLKL)通路进而对麦芽酚铝[Al(mal)3]致神经细胞程序性坏死产生影响。<br>　　方法:<br>　　随机将32只C57BL/6小鼠分为:对照(生理盐水)组、低剂量20μmol/kgAl(mal)3组、中剂量40μmol/kgAl(mal)3组、高剂量80μmol/kgAl(mal)3组，腹腔注射染毒。采用Morris水迷宫实验测试小鼠的空间学习记忆能力;尼氏染色观察小鼠脑组织病理形态变化;蛋白免疫印迹法测定海马组织中HSP90、RIP1、RIP3、MLKL的蛋白表达水平。用不同时间(12h、24h、36h、48h)不同浓度的麦芽酚铝(0μmol/L、100μmol/L、200μmol/L、400μmol/LAl(mal)3和1200μmol/LMaltol)处理PC12细胞，之后利用小干扰RNA(siRNA)干预PC12细胞的HSP90mRNA。转染分组为空白对照组、阴性对照组(NC组)、转染试剂组(R4000组)、50nmol/LsiRNA组+400μmol/LAl(mal)3组、50nmol/LsiRNA组、400μmol/LAl(mal)3组。CCK-8检测不同时间及剂量染铝对PC12细胞活力的影响;采用流式细胞术测试PC12细胞染毒及干预后的细胞凋亡坏死情况;RT-PCR技术检测HSP90mRNA的表达来确定转染时间和转染浓度;用蛋白免疫印迹法测定细胞中HSP90、RIP1、RIP3、MLKL、p-MLKL的蛋白表达水平。<br>　　结果:<br>　　1.1与生理盐水对照组小鼠相比，中、高剂量组的小鼠体重稍有下降但差异不具有统计学意义(P＞0.05)。水迷宫实验中，各组小鼠穿越平台的次数经H检验结果显示，H=9.499,P=0.023。各组间差异有统计学意义(P＜0.05)。随着Al(mal)3浓度的升高，小鼠的记忆能力下降。搜索策略图显示，对照组小鼠的搜索策略随着训练次数的增加而呈现“随机式-趋向式-直线式”，但是染铝后小鼠的搜索策略则呈现“随机式-边缘式”。<br>　　1.2在尼氏染色实验中观察发现:随着麦芽酚铝染毒浓度的升高，小鼠海马神经细胞数量逐渐减，排列紊乱，尼氏小体减少。高剂量染铝组小鼠海马区可见细胞数量明显减少，细胞排列紊乱明显，细胞间分层不清。<br>　　1.3Westernblotting结果显示，小鼠海马组织中有关RIP1、RIP3、MLKL、HSP90蛋白表达水平，与对照组比较，高剂量染铝组小鼠的海马组织中RIP1蛋白表达水平高于对照组且差异有统计学意义(P＜0.05)。中剂量和高剂量染铝组小鼠的海马组织中RIP3、MLKL、HSP90蛋白表达水平高于对照组且差异有统计学意义(P＜0.05)。而各低剂量染铝组小鼠的海马组织中各蛋白的表达水平与对照组相比差异无统计学意义(P＞0.05)。<br>　　1.4细胞活力检测结果发现，PC12细胞的活力随着Al(mal)3染毒时间的增长、染毒剂量的增加而降低。染毒12h,各剂量染毒组PC12细胞的活力变化差异不明显(P＞0.05)。相较于其他时间剂量组，24h时400μmol/LAl(mal)3染毒已使细胞活力的下降至70％-80％。<br>　　1.5不同时间，不同剂量麦芽酚铝染毒时:光镜下观察发现，同一染毒时间组中，0μmol/LAl(mal)3组的细胞形态良好且细胞数量多，胞体较小，轴突比较细长,细胞之间紧密连接，随着Al(mal)3剂量的增多，染毒剂量逐渐增高时，细胞数目逐渐减少，轴突长度开始变短，细胞间的连接减少，在400μmol/LAl(mal)3组时细胞形态变化尤为明显;不同染毒时间时，染毒12h各组细胞间的变化差异不明显(P＞0.05),与其他染毒时间相比，染毒48h时，发现贴壁的细胞减少，漂浮的细胞明显增多。且400μmol/LAl(mal)3组细胞形态变化仍最明显。<br>　　1.6AnnexinⅤITC/PI凋亡检测试剂检测PC12细胞12、24、36、48小时麦芽酚铝染毒对细胞坏死情况的影响，结果显示，在麦芽酚铝染毒12h时，各剂量组之间细胞的坏死率差异不明显(P＞0.05)。而染毒24h时，与对照组相比，200μmol/L、400μmol/LAl(mal)3组的PC12细胞坏死率升高，差异显著(P＜0.05)。染毒36h,PC12细胞各组间坏死率差异无统计学意义(P＞0.05)。染毒48h,100μmol/LPC12细胞的坏死率升高，200μmol/L、400μmol/LAl(mal)3染毒的PC12细胞坏死率与对照组相比，差异无统计学意义(P＞0.05)。但1200μmol/LMaltol组的PC12细胞的坏死率显著升高(P＜0.05)。<br>　　1.7不同时间，不同剂量麦芽酚铝染毒，利用蛋白免疫印迹实验检测PC12细胞中的HSP90、RIP3、MLKL、p-MLKL蛋白表达水平发现，染毒12h,各剂量组中的蛋白差异无统计学意义(P＞0.05);染毒24h,与对照组相比，此时400μmol/LAl(mal)3组中蛋白HSP90、RIP3、MLKL、p-MLKL的表达水平升高，差异均有统计学意义(P＜0.05);染毒36h,与对照组相比，400μmol/LAl(mal)3组中蛋白RIP3的表达水平升高，差异有统计学意义(P＜0.05),100μmol/L、200μmol/LAl(mal)3组中蛋白p-MLKL的表达水平升高，差异有统计学意义(P＜0.05);染毒48h,400μmol/LAl(mal)3组中蛋白HSP90的表达水平升高，差异有统计学意义(P＜0.05),100μmol/LAl(mal)3组中蛋白RIP3、MLKL、p-MLKL的表达水平升高，差异有统计学意义(P＜0.05)。<br>　　1.8siRNA干预PC12细胞36h,继续染毒24h后，用流式细胞术检测干预后细胞的坏死率结果显示:空白对照组、NC组、R4000组三组间的差异无统计学意义(P＞0.05)。而与NC组相比,siRNA+Al(mal)3组细胞的坏死率差异不明显(P＞0.05),siRNA组干预组细胞的坏死率明显下降，差异有统计学意义(P＜0.05);Al(mal)3组细胞坏死明显，坏死率高于其他各组且差异有统计学意义(P＜0.05)。<br>　　1.9siRNA干预PC12细胞36h后，继续染毒24h,收样后进行蛋白免疫印迹检测，检测结果显示:与空白对照组相比，NC组和R4000组蛋白HSP90、RIP1、RIP3、MLKL、p-MLKL表达水平无明显差异(P＞0.05)。与NC组相比，siRNA组HSP90、RIP1、RIP3、MLKL、p-MLKL蛋白表达下降且差异有统计学意义(P＜0.05);Al(mal)3组HSP90、RIP1、RIP3、MLKL、p-MLKL蛋白表达升高且有统计学意义(P＜0.05);siRNA+Al(mal)3组HSP90、RIP1、RIP3、MLKL、p-MLKL蛋白表达水平差异均无统计学意义(P＞0.05)。与Al(mal)3组相比，其余各组蛋白的表达水平差异均有统计学意义(P＜0.05)。<br>　　结论:<br>　　1.Al(mal)3会导致C57BL/6种实验小鼠的神经细胞发生程序性坏死并致小鼠空间记忆能力损伤，HSP90在这一过程中有参与。<br>　　2.Al(mal)3致神经细胞发生程序性坏死的关键蛋白RIP1/RIP3/MLKL受HSP90调控，并且HP90可以进一步对Al(mal)3致神经细胞程序性坏死产生影响。