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摘要目的:<br>　　口腔鳞状细胞癌(oralsquamouscellcarcinoma,OSCC)由于其发病率高，预后不佳，目前尚未找到理想的药物治疗。华蟾素(Cinobufotalin)从中国大鲵或黑眶蟾蜍的皮肤中提取而得，能够利水消肿、清热解毒、软坚散结。在抗肿瘤方面，它有着抑制肿瘤细胞增殖、侵袭与转移，促进细胞凋亡，诱导细胞自噬，调节免疫应答等多种机制，具有治疗OSCC的潜能。本研究通过网络药理学分析和体外细胞实验验证，确定华蟾素对OSCC细胞增殖及凋亡的作用，并探究华蟾素通过调控自噬相关基因mRNA的表达对OSCC细胞的影响。<br>　　材料与方法:<br>　　第一部分:华蟾素作用于OSCC的网络药理学分析<br>　　通过GeneCards、OMIM数据库获取OSCC的潜在治疗靶点;在PubChem数据库中找出华蟾素及其化学成分的化学结构式,通过SwissTargetPrediction网站预测靶标基因;在Venn网站中获取华蟾素-OSCC的交集靶点;使用STRING数据库获取PPI网络并用Cytoscape软件绘制网络图;利用Metascape数据库对交集靶点进行GO富集分析和KEGG通路分析;通过分子对接技术分析华蟾素与核心靶点间的结合力。<br>　　第二部分:华蟾素作用于OSCC细胞的体外实验研究<br>　　通过CCK-8实验检测CAL27和HOK细胞的增殖情况;流式细胞术检测CAL27细胞凋亡情况;RT-PCR方法检测CAL27细胞中核心靶点及自噬相关基因mRNA的表达水平，探究华蟾素治疗OSCC可能的途径。<br>　　结果:<br>　　第一部分:网络药理学分析<br>　　将OSCC在GeneCards数据库中以Relevancescore≥50分为筛选条件得到靶点，OMIM数据库中的OSCC靶点补充，得到华蟾素作用于OSCC的相关靶点76个;<br>　　PPI分析出华蟾素治疗OSCC的核心靶基因为STAT3、SRC、AKT1、PIK3R1和MAPK3等;<br>　　GO富集分析有56条生物学过程，包括20条分子功能，20条生物过程以及16条细胞成分，主要涉及蛋白质磷酸化，受体复合物，蛋白激酶活性等;KEGG通路富集筛选出20条信号通路，其中富集水平最高的为Pathwaysincancer信号通路，其次为PI3K-Akt信号通路;<br>　　分子对接结果显示华蟾素与核心靶点之间结合能力良好。<br>　　第二部分:体外细胞实验研究<br>　　CCK-8实验结果显示，当华蟾素浓度＜4mg/ml时，对HOK细胞增殖没有明显抑制作用（P＞0.05）,但可以呈时间和剂量依赖性地抑制OSCC细胞的增殖（P＜0.0001）,当华蟾素浓度≥4mg/ml时，对HOK细胞增殖有抑制作用（P＜0.05）,但对CAL27细胞增殖的抑制更佳显著（P＜0.0001）;<br>　　流式细胞术实验结果显示，与不加药组相比华蟾素呈浓度依赖性诱导OSCC细胞凋亡;<br>　　RT-PCR实验结果显示华蟾素浓度在4mg/ml时可显著上调自噬相关基因Beclin1（P＜0.001）及LC3（P＜0.0001）的mRNA表达，并下调核心靶点STAT3（P＜0.001）、SRC（P＜0.001）、AKT1（P＜0.0001）、PIK3R1（P＜0.0001）和MAPK3（P＜0.0001）的表达。<br>　　结论:<br>　　通过网络药理学分析获得华蟾素作用于OSCC的靶点共有76个，其中核心靶点为STAT3、SRC、AKT1、PIK3R1和MAPK3,并且分子对接表明华蟾素和核心靶点结合良好。KEGG分析显示PI3K-AKT通路是华蟾素作用于OSCC的核心通路。<br>　　细胞实验结果表明华蟾素可以抑制OSCC细胞增殖并促进细胞凋亡，提高OSCC细胞自噬相关基因mRNA的表达水平，诱导细胞自噬，并且抑制核心靶点mRNA的表达水平。这一发现为华蟾素对OSCC的抗癌治疗提供了理论支持和科学依据。