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摘要目的:<br>　　探讨纤维蛋白原Bβ15-42肽(Fibrin-derivedpeptideBβ15-42,FgBβ15-42肽)在细胞水平对缺氧复氧急性肾损伤(acutekindyinjury,AKI)线粒体自噬的影响。<br>　　方法:<br>　　(1)体外培养人肾皮质近曲小管上皮细胞(HumanKidney-2,HK2),分为正常对照组(Control组)、缺氧复氧(hypoxiareoxygenation,H/R)模型组(H/R组)、H/R+9uMFgBβ15-42肽组(Fg组)、H/R+20uM氯喹(chloroquine,CQ)组(CQ组)、H/R+9uMFgBβ15-42肽+20uM氯喹组(Fg+CQ组)。<br>　　(2)模型的构建:<br>　　H/R组:用无血清DMEM/F12培养基在正常有氧条件下(5％CO2,21％O2)将细胞同质化处理12小时后，用磷酸盐缓冲液(Phosphatebuffersaline,PBS)清洗2-3遍，加入无糖无血清的DMEM/F12培养基后置于三气箱(5％CO2,1％O2和94％N2)24小时，再次用PBS清洗后加入含血清的DMEM/F12培养基后然后再置于有氧环境中(5％CO2,21％O2)4小时。<br>　　Control组:为同质化处理后的细胞更换完全培养基，在有氧条件下(5％CO2,21％O2)培养28小时。<br>　　Fg组:根据上述方法造模，在缺氧完成后进行复氧时的完全培养基中加入FgBβ15-42肽9uM进行干预。<br>　　CQ组:在进行同质化处理时的不含血清的培养基中加入氯喹进行预处理(20uM)，后序步骤同H/R组。<br>　　Fg+CQ组:按照上述CQ组及FgBβ15-42组在不同时间段的加药顺序、剂量,及H/R组的造模时间进行干预。<br>　　（3）细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒（CCK-8）检测HK2细胞活力;电子显微镜观察线粒体形态、线粒体自噬体结构及数量;WesternBlot检测凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤/白细胞-2（B-celllymphoma/Leukemia-2,Bcl-2）、Bcl-2相关X（Bcl-2associatedX,Bax）,及自噬相关蛋白P62、微管相关蛋白质轻链3（Microtubuleassociatedproteinlightchain3,LC3）的表达水平。<br>　　结果:<br>　　（1）各组细胞生长情况:与Control组相比，H/R组细胞的存活率下降（P＜0.01）;与H/R组相比，Fg组、CQ组、Fg+CQ组细胞的存活率回升（P＜0.01）,Fg组、CQ组、Fg+CQ组三组间细胞存活率无显著差异。<br>　　（2）各组细胞电镜下线粒体自噬小体情况:Control组线粒体多为正常形态,线粒体自噬体偶见;H/R组线粒体损伤明显，出现了肿胀，棘断裂等，且线粒体自噬体的数目较Control组明显增多;Fg组、CQ组、Fg+CQ组中线粒体自噬体较H/R组均减少。<br>　　（3）各组细胞凋亡蛋白表达:与Control组相比，H/R组细胞中抑凋亡蛋白Bcl-2表达显著降低（P＜0.01）,促凋亡蛋白Bax表达水平显著升高（P＜0.01）;与H/R组相比，Fg组、CQ组、Fg+CQ组细胞Bcl-2表达升高（P＜0.05）,Bax表达下降（P＜0.05）,细胞凋亡被抑制，Fg组、CQ组、Fg+CQ组，三组之间无显著差异。<br>　　（4）各组细胞自噬相关蛋白表达:与Control组相比，H/R组细胞中自噬标志性蛋白LC-3Ⅱ/Ⅰ表达上调（P＜0.05）,自噬底物蛋白P62表达下调（P＜0.01）,H/R诱导细胞自噬激活;与H/R组相比，Fg组、CQ组、Fg+CQ组细胞LC-3Ⅱ/Ⅰ表达下调（P＜0.01）,P62表达上调（P＜0.05）,细胞自噬被抑制，Fg组、CQ组、Fg+CQ组，三组之间无显著差异。<br>　　结论:<br>　　（1）缺氧24小时复氧4小时可成功建立H/R-AKI肾小管上皮细胞模型;<br>　　（2）缺氧复氧损伤可导致HK2细胞存活率下降，并激活凋亡、自噬及线粒体自噬;<br>　　（3）FgBβ15-42肽干预后可降低H/R-AKI细胞中凋亡、自噬及线粒体自噬水平，对HK2细胞H/R损伤有保护作用;<br>　　（4）氯喹预处理后也可降低H/R-AKI细胞中凋亡、自噬及线粒体自噬水平,对HK2细胞H/R损伤有保护作用;<br>　　（5）氯喹+FgBβ15-42肽联合干预时，H/R-AKI细胞中凋亡、自噬及线粒体自噬水平也出现下调，对HK2细胞H/R损伤有保护作用，但与单一用药无明显差异，细胞的自噬、凋亡水平有一定限度，不能被无限抑制。