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摘要如今恶性肿瘤发病率仍在不断上升，针对肿瘤生长迁移的关键靶点开发新型靶向治疗抗体成为热门研究方向。肿瘤的生长、浸润与转移因其自身特点而依赖于肿瘤血管的生成，抑制肿瘤血管生成从而抑制肿瘤生长转移已成为探索肿瘤治疗的重要突破口。阻断血管内皮生长因子（VEGF）-血管内皮生长因子受体（VEGFR）这一通路是研究靶向抗血管生成药物的思路之一。目前用于阻断这一通路的药物主要是小分子药物及单克隆抗体，但这两类药物分别具有一定的缺陷，小分子类药物靶向性差带来较大副作用，而单克隆抗体因分子量较大造成渗透效果差，稳定性低及亲和力弱等问题，同时生产成本较高的问题也亟待解决。软骨鱼类中发现的IgNAR,其可变区VNAR因其自身结构特点，在分子量小渗透性效果好的基础之上具有很高抗原表位结合力和稳定性，且结构更为简单从而能够降低生产成本，是抗血管生成靶向药的研究新思路。<br>　　目的:通过免疫条纹斑竹鲨获得针对VEGFR2抗原表位的IgNAR,噬菌体文库固相淘选获得抗VEGFR2的VNAR序列后重组原核表达，并评价其在分子和细胞水平上的活性，最终筛选出具有高效抗血管生成作用的VNAR。<br>　　方法:利用原核表达系统（E.coli）对分析所得VEGFR2抗原表位进行重组表达，并以其为免疫原对条纹斑竹鲨进行为期四个月的免疫，同时通过比对获得IgNAR保守区的保守序列，并以其作为免疫原进行兔抗制备，用于检测鲨鱼血清效价。结束免疫后取脾脏，一部分用于转录组测序，另一部分提RNA建立噬菌体文库。通过三轮固相淘选获得特异性靶向VEGFR2的VNAR序列。对其进行原核重组表达纯化，鉴定其分子水平上的亲和力以及细胞水平上的抗血管生成活性。<br>　　结果:1）制备了用于检测鲨鱼血清效价的抗IgNAR兔多克隆抗体，具有较高效价和特异性。2）用制备的兔多抗对鲨鱼免疫水平进行评价，在三免后有较高水平IgNAR富集。3）从转录组水平上对免疫效果进行分析，构建了抗VEGFR2噬菌体文库，固相淘选获得五条目的序列，且保守区分析和三维模拟均符合VNAR特征。4）通过原核表达获得了可溶性表达的正确折叠的VNAR。5）通过ELISA和细胞实验证明其中的两条VNAR,VNAR-A6和VNAR-E3具有较好的抗原亲和力以及抗血管生成活性，能够抑制内皮细胞的增殖、迁移，具有抗血管生成活性。<br>　　结论:通过免疫条纹斑竹鲨筛选获得了抗VEGFR2的单域抗体，为获得可阻断VEGF-VEGFR通路的新药研发提供新的研究思路和具体方法，拓宽抗血管生成药物的使用范围。