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健康成人消化道和环境污水中食源性致病菌及其耐药基因特征

摘要研究目的:<br>  本研究旨在调查健康成人胃肠道携带食源性致病菌的本底情况,以及检测耐药微生物和抗生素耐药基因在人胃肠道和环境污水中的分布特征,为调查和处置食源性疾病暴发事件和食源性疾病监测提供健康人本底数据,为临床诊断和治疗食源性疾病提供耐药菌和耐药基因的基本信息,辅助临床正确用药和规范用药。<br>  研究方法:<br>  以广州市花都人爱医院为哨点医院,在2022年全年在哨点医院采集健康体检人群的肛拭子样本,每月采集50份,12个月共计600份样本。冷藏运送至广东省疾病预防控制中心实验室,使用QIAamp? MinElute Virus Spin Kit和NxTAG?Gastrointestinal Pathogen Panel分别进行提取总核酸和胃肠道多病原检测。对检测结果结合人口学信息分析病原的分布特征。<br>  以广州市猎德污水处理厂为采样点,在2022年5月至2023年3月在采样点收集未经处理的污水,共9份样本;使用QIAamp? DNA Mini Kit对健康人肛拭子和污水样本提取核酸(DNA);再通过Illumina二代测序技术进行宏基因组测序。根据NCBI、CARD、ResFinder等数据库对数据进行物种注释和基因注释,再进行统计学分析和生物信息学分析。<br>  研究结果:<br>  多病原检测发现了五种细菌和两种病毒在健康人中的存在情况,样本核酸阳性率为9.54%,各病原及其阳性率为:艰难梭菌4.42%、沙门菌1.24%、弯曲杆菌0.88%、肠毒素性大肠埃希菌0.71%、产志贺毒素大肠埃希菌0.71%、志贺菌/EIEC 0.53%、诺如病毒0.53%、腺病毒1.06%。细菌培养结果:7例沙门菌阳性样本中6例培养阳性,5例弯曲菌中1例培养阳性,4例艰难梭菌培养阴性。<br>  健康人样本宏基因组测序结果:在每个样本丰度前十的微生物中发现致病菌4个:EHEC、志贺氏菌、克雷伯菌、链球菌,其它致病菌还有鼠伤寒沙门菌和鼠疫耶尔森菌。抗生素耐药基因162个,总计988,大致分为十五类,以氨基糖苷类和其它类的多重耐药基因最多。<br>  污水测序结果:发现了 1587种微生物,丰度前20的微生物大约占物种总丰度的75%左右,2022年8-10月,2023年1-3月份的物种多样性更高,主成分分析表明9个月份中有5个月的物种相似性较高,微生物和耐药基因的网络图表明肠道微生物与耐药基因的关联更为密切,污水中的多数耐药基因来源于人体中的微生物。耐药基因检测出138个,总计482,2022年10月份发现的耐药基因最多,且主要是多重耐药基因。<br>  研究结论:<br>  本研究发现男性和餐饮业人士感染致病菌的风险更高,[18,40]年龄组的人可能比高年龄组有更高的风险,这与宏基因组测序结果一致,链球菌对女性可能有更高的风险。肠道微生物携带抗生素耐药基因的情况不容乐观,尤其是氨基糖苷和其它多重耐药基因。我们应高度重视致病菌的耐药性对食源性疾病的影响,切实做好暴发事件中临床诊断和治疗。

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