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摘要目的:<br>　　肝癌是全球恶性肿瘤中第六大常见癌症类型，也是癌症相关死亡的第三大原因。肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是最常见的肝癌类型，发病率持续上升。尽管在过去的几十年来，人们在针对肝癌的治疗策略上取得了巨大的进展，包括手术切除、肝移植和综合治疗等，但由于肝癌起病隐匿，确诊时大多数已经晚期，而治疗后复发转移率高，目前患者五年生存率仍然很低。因此，研究肝癌的分子机制，识别有前景的肝癌诊断和预后生物标志物，可能有助于提供有效的治疗靶点，改善患者预后。越来越多的证据研究表明LIM结构域和肌动蛋白结合1(LIM Domain And Actin Binding 1,LIMA1)是一种肌动蛋白结合细胞骨架蛋白，在肿瘤的增殖、凋亡、迁移、侵袭、耐药和免疫反应等生物学过程中发挥着至关重要的作用。本文旨在探索LIMA1基因在肝细胞癌发生发展中的作用机制，从而为临床早期诊断HCC和靶向治疗的新策略提供见解。<br>　　方法:<br>　　(1)基于TMT相对定量蛋白质组学分析，筛选出HCC癌和癌旁组织的显著差异基因，结合已发表文献，进一步确定目标基因一LIMA1。<br>　　(2)下载TCGA和GTEx数据集进行分析，预测LIMA1的差异表达;通过UALCAN和Kaplan-Meier Plotter数据库，分析LIMA1表达与HCC患者临床病理特征和预后之间的相关性。<br>　　(3)通过 STRING、Metscape、GSCALite、CBioPortal、TIMER 等数据库，对数据库中LIMA1和其相互作用蛋白进行功能和通路富集、基因组改变、免疫浸润等进行分析。<br>　　(4)通过免疫组化检测LIMA1在肝癌组织和癌旁组织的表达差异。<br>　　(5)筛选合适肝细胞癌细胞系(MHCC97L和SK-HEP-1),应用转染小干扰RNA(Small interfering RNA,siRNA)方法构建敲低 LIMA1 基因的 HCC 细胞系,并通过Western Blot的方法检测转染效率。<br>　　(6)将si-LIMA1、si-NC分别转染至MHCC97L和SK-HEP-1两种肝细胞癌细胞系中，转染48h后，评估沉默LIMA1后对肝细胞癌细胞恶性表型的影响。<br>　　(7)通过CCK-8实验、克隆形成实验来验证LIMA1对肝细胞癌增殖能力的影响;通过划痕实验、trallswell实验来验证LIMA1对肝细胞癌的侵袭、转移能力的影响。<br>　　(8)应用软件Graphpad Prism 8.3.0对实验数据进行统计学分析并绘图。<br>　　结果:<br>　　(1)通过TMT定量蛋白质组学比较肝癌组织和癌旁组织蛋白质表达差异变化,按照Foldchange＞1.2且Pvalue＜0.05的标准，筛选出肝癌组织和癌旁组织的1118个显著差异蛋白。经过进一步的数据分析和文献报道，发现LIMA1与恶性肿瘤的发生发展有密切关系，因此将LIMA1选作本次研究的目标基因。<br>　　(2)通过TCGA和GTEx数据集分析发现，LIMA1在HCC患者中高表达，其表达水平与临床病理特征之间呈负相关，提示预后差;通过对共表达分析结果进行,结果表明LIMA1及其相互作用蛋白对于调节肌动蛋白和上皮间质转化的通路至关重要，而且LIMA1在细胞周期、基因调控、血管生成和脂质代谢等生物学过程中发挥着关键作用。<br>　　(3)收集2021年2月到2022年12月在山西白求恩医院普通外科进行外科手术切除后组织病理诊断学诊断为“肝细胞癌”的癌组织和配对的癌旁组织，通过免疫组化实验验证LIMA1在HCC组织中主要表达在细胞质和胞浆中，表达明显高于其在癌旁正常组织(P＜0.001)中的表达，其相对表达量的差值为(1.36±2.35)。<br>　　(4)相比正常肝细胞系，LIMA1基因在4株HCC细胞系中表达上调，且在MHCC97L细胞中表达最高(P＜0.001),在SK-HEP-1细胞中表达较高(P=0.001),因此选用这两株细胞系进行后续实验。<br>　　(5)通过RNAi干扰技术构建LIMA1瞬时敲低细胞系模型，敲低MHCC97L和SK-HEP-1中LIMA1的表达，对细胞相关恶性生物学功能进行了实验验证，结果显示敲低LIMA1后HCC细胞的增殖迁移及侵袭能力都受到明显的抑制。<br>　　结论:<br>　　(1)LIMA1基因在肝癌组织和细胞系中异常高表达，这种异常表达与较差的临床病理特征和预后生存相关。敲低LIMA1导致HCC细胞增殖、迁移与侵袭能力受到抑制。<br>　　(2)LIMA1的表达与肿瘤浸润免疫细胞水平相关，在肌动蛋白动力学、细胞粘附与转移、上皮-间充质转变、血管新生和代谢等生物学过程发挥着重要的调控作用。<br>　　(3)这些结果为后续深入研究LIMA1在肝细胞癌发生发展中的作用及其分子调控机制的研究奠定了一定的基础，为未来探索肝癌的治疗策略提供了新思路。