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摘要目的:<br>　　研究局部应用H4受体拮抗剂对实验性过敏性结膜炎的治疗作用,探究H4受体拮抗剂对过敏性结膜炎杯状细胞的功能影响以及相关机制。<br>　　方法:<br>　　1. 建立过敏性结膜炎小鼠模型取6-8周雄性C57BL/6小鼠12只，随机分为2组:正常对照组、模型组每组6只。造模分为致敏阶段和激发阶段，致敏阶段:第0天、第7天和第15天，将100ugOVA用100ul生理盐水溶开后，加入100ul氢氧化铝佐剂完全混合后对模型组进行腹腔注射，正常对照组予以生理盐水处理。激发阶段:第16-29天，以OVA 10mg/Kg(即10ug/g)溶于10ul生理盐水，震荡混匀后对模型组进行滴眼激发，滴眼期持续两周。第29天滴眼结束30min后，分别观察正常对照组、模型组小鼠的眼表情况，对小鼠眼部症状评分，搔抓次数统计,ELISA实验测血清IgE水平,HE染色观察嗜酸性粒细胞聚集情况,计算脾指数。评价造模是否成功。<br>　　2.建立药物干预的过敏性结膜炎小鼠模型取6-8周雄性C57BL/6小鼠36只,随机分为6组:正常对照组、模型组、溶剂对照组、H4R拮抗剂0.1％组、H4R拮抗剂0.25％组，阳性对照组(H1R拮抗剂0.1％组)，每组6只。造模分为致敏阶段、激发阶段和药物干预阶段。致敏阶段:第0天、第7天和第15天，将100ugOVA用100ul生理盐水溶开后，加入100ul氢氧化铝佐剂完全混匀，对模型组、溶剂对照组、H4R拮抗剂0.1％组、H4R拮抗剂0.25％组，阳性对照组(H1R拮抗剂0.1％组)进行腹腔注射，正常对照组予以生理盐水处理;激发阶段:第16-29天，以OVA 10mg/Kg(即10ug/g)溶于10ul生理盐水，震荡混匀后对模型组、溶剂对照组、H4R拮抗剂0.1％组、H4R拮抗剂0.25％组，阳性对照组(H1R拮抗剂0.1％组)滴眼激发，持续两周天;干预阶段:第16-29天，在局部点眼激发前30分钟对H4R拮抗剂0.1％组、H4R拮抗剂0.25％组，阳性对照组(H1R拮抗剂0.1％组)分别以H4R拮抗剂0.1％、H4R拮抗剂0.25％、H1R拮抗剂0.1％的剂量浓度的溶液进行滴眼预治疗，溶剂对照组予以生理盐水滴眼干预，正常对照组和模型组不予以滴眼干预。第29天滴眼结束30min后，观察小鼠的眼表情况，对各组小鼠眼部症状评分;<br>　　3.酶联免疫吸附实验(ELISA):利用双抗体夹心法检测应用干预药物H4R拮抗剂和H1R拮抗剂各组小鼠血清中IgE含量变化;<br>　　4.蛋白免疫印迹实验(Western blot):检测应用干预药物H4R拮抗剂和H1R拮抗剂各组小鼠炎性因子IL-6、IL-8、IL-13的蛋白变达情况变化;<br>　　5. 苏木素—伊红染色法(HE染色):镜下观察应用干预药物H4R拮抗剂和H1R拮抗剂后各组小鼠嗜酸性粒细胞浸润情况;<br>　　6.蛋白免疫印迹实验(Western blot):检测应用干预药物H4R拮抗剂和H1R拮抗剂后对眼睑结膜组织杯状细胞分泌粘蛋白MUC5AC的影响;<br>　　7.实时荧光定量PCR(RT-PCR):检测应用干预药物H4R拮抗剂和H1R拮抗剂后mRNA水平上对MUC5AC的表达变化影响;<br>　　8.蛋白免疫印迹实验(Western blot)和实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测应用EGFR抑制剂后MUC5AC在蛋白水平和mRNA水平的表达变化;<br>　　9. 过碘酸席夫染色(PAS染色):观察应用干预药物H4R拮抗剂、H1R拮抗剂以及EGFR通路抑制剂后MUC5AC的表达情况;<br>　　10.免疫组化法:观察应用干预药物H4R拮抗剂、H1R拮抗剂以及EGFR通路抑制剂后MUC5AC的表达情况;<br>　　11.蛋白免疫印迹实验(Western blot)和实时荧光定量法(RT-PCR):观察应用干预药物H4R拮抗剂后检测EGFR在蛋白和mRNA水平上的变化;<br>　　结果:<br>　　1.模型组眼部症状评分、搔抓次数、血清IgE水平、HE染色镜下观察嗜酸性粒细胞聚集情况、脾指数都显著高于正常对照组，提示实验性过敏性结膜炎小鼠造模成功。<br>　　2.加入H4R拮抗剂和H1R拮抗剂治疗后，与正常对照组相比，模型组眼部症状评分、搔抓次数、血清IgE水平、HE染色镜下观察嗜酸性粒细胞浸润情况、白介素IL-6、IL-8、IL-13蛋白表达都显著升高，溶剂对照组接近模型组表现，而与模型组相比，H4R拮抗剂0.1％组、H4R拮抗剂0.25％组，阳性对照组(H1R拮抗剂0.1％组)，这些指标都显著降低，且H4R拮抗剂组在搔抓次数统计方面抑制瘙痒效果优于阳性对照组(H1R拮抗剂0.1％组)，提示H4R拮抗剂可改善过敏性结膜炎炎性症状,且H4R拮抗剂抑制瘙痒效果优于H1R拮抗剂。<br>　　3.加入H4R拮抗剂后，与正常对照组相比，模型组的MUC5AC在PAS染色、蛋白水平和mRNA水平上的表达都显著上调，而与模型组相比，H4R拮抗剂0.1％组、H4R拮抗剂0.25％组，阳性对照组(H1R拮抗剂0.1％组)的MUC5AC在蛋白水平和mRNA水平上都显著下调，提示H4R拮抗剂可影响结膜杯状细胞分泌粘蛋白的功能。<br>　　4.加入EGFR抑制剂后，与模型组相比，行免疫组化、蛋白免疫印迹实验和荧光定量PCR技术结果提示EGFR抑制剂可抑制MUC5AC分泌，使MUC5AC分泌趋于正常对照组水平;而同时H4R拮抗剂组的EGFR在蛋白水平和mRNA水平上都呈现下调趋势，也抑制了 MUC5AC在蛋白水平和mRNA水平上的表达，提示H4R拮抗剂抑制结膜杯状细胞分泌粘蛋白的机制可能是通过阻断EGFR通路实现的。<br>　　结论:<br>　　采用腹腔注射免疫+局部滴眼激发方式可以成功构建AC模型。H4受体拮抗剂可减轻过敏性结膜炎的眼部症状及炎症反应，在抑制瘙痒方面较H1受体拮抗剂更为突出。H4受体拮抗剂通过阻断EGFR信号通路抑制过敏性结膜炎小鼠结膜杯状细胞的过度分泌。