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高效毛细管电泳在分离测定龙血竭及其制剂中龙血素的应用研究

摘要目的:<br>  本文第一部分旨在建立一种快速、全面、高效、可同时分离测定龙血素A,龙血素B,龙血素C和龙血素D的以有机溶剂甲醇和乙二醇为背景电解质(BGE)添加剂的毛细管区带电泳法,为龙血竭药材及相关制剂的质量控制提供方法依据。本文第二部分通过毛细管区带电泳法测定四种龙血素的pKa值,为研究分析物的相关反应和药动学特征提供依据。<br>  方法:<br>  1、采用配备二极管阵列检测器的BECKMAN P/ACE MDQ毛细管电泳仪,有效长度为30 cm的未涂层熔融石英毛细管柱(40.2cm×75μm id),考察了检测波长、缓冲溶液的浓度及pH、添加剂种类及含量、运行电压和运行温度等对四种龙血素分离的影响,得到同时分离测定龙血素A、B、C、D的最佳毛细管电泳条件为:60.0 mmol/L硼砂(pH=9.60)为缓冲溶液,5.0%(v/v)甲醇和3.0%(v/v)乙二醇为添加剂,检测波长329nm,进样压力0.3 psi,进样时间3 s,运行电压17.5 kV,运行温度25℃。<br>  2、采用配备二极管阵列检测器的BECKMAN P/ACE MDQ毛细管电泳仪,有效长度为30 cm的未涂层熔融石英毛细管柱(40.2 cm×75 μm id);在恒定离子强度条件下通过Origin非线性拟合方法依据不同pH值下的有效迁移率测得四种龙血素的pKa值。<br>  结果:<br>  1、第一部分的研究结果表明,在最佳的电泳条件下,龙血素A、B、C、D可以在10 min内实现基线分离;经方法学考察,各分析物的线性关系良好,相关系数在0.9937~0.9994之间;峰面积的精密度分别为0.71%~1.6%(日内)和1.3%~1.9%(日间),迁移时间的精密度分别为0.31%~0.75%(日内)和0.52%~1.5%(日间);实际样品中各分析物的平均回收率在98.4%~101.8%之间。<br>  2、测得四种龙血素的pKa值分别为龙血素A(8.01)、龙血素B(8.04)、龙血素 C(8.24)、龙血素 D(8.35)。<br>  结论:<br>  本文以有机溶剂为添加剂,建立了一种简单、快速、高效的毛细管区带电泳法,可同时分析测定龙血竭中四种二氢查耳酮类化合物,为龙血竭药材及其制剂的质量控制和开发应用提供了一种可供选择的方法。采用毛细管区带电泳法成功测定了四种龙血素的pKa值,为毛细管电泳法测定其他二氢查耳酮类化合物pKa值提供了方法参考。

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