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RNA干扰参与热激条件下裂殖酵母线粒体基因组编码蛋白表达的探究

摘要RNA干扰(RNAi)是由小干扰RNA(siRNAs)介导的保守沉默机制。RNA干扰的过程有两个重要的酶和蛋白,是核糖核酸酶Ⅲ酶Dicer(Dcr1)和名为Argonaute(Ago1)的保守蛋白,但在裂殖酵母的线粒体中是否存在RNA干扰还未被报道过。裂殖酵母的线粒体在热激条件下表现出与RNA干扰存在联系。因此在本论文中研究了线粒体基因组编码蛋白表达在热激条件下与Dcr1和Ago1的联系。<br>  本文对30℃和37℃条件下的野生型菌株进行生长表型测定和免疫印迹分析以及实时荧光定量PCR实验,结果显示37℃的条件下野生型菌株生长缓慢,线粒体基因组编码蛋白表达量降低,其RNA水平总体表现出上升趋势。提取30℃和37℃条件下全细胞蛋白进行免疫印迹分析,结果显示37℃条件下Ago1表达量上升,且通过荧光共定位实验显示Ago1蛋白在37℃下出现与线粒体共定位时间是在24 h,更早于在30℃下与线粒体共定位的时间(36 h);而Dcr1蛋白在30℃下并没有与线粒体共定位,在37℃下36 h时出现与线粒体共定位,并且通过免疫印迹分析也进一步验证了 Ago1和Dcr1在线粒体有分布。同时通过同源重组的方法构建△dcr1,△ago1敲除菌,通过生长表型测定和免疫印迹分析以及实时荧光定量PCR实验,结果显示△dcr1,△ago1敲除菌在30℃和37℃下其生长略微受到影响,在37℃条件下,△dcr1,△ago1敲除菌的蛋白表达量上升,回补了热激对野生型菌株造成影响,且△dcr1,△ago1敲除菌在37℃条件下的转录水平在一定程度上回补了热激对菌株线粒体基因造成的影响。<br>  综上所述,本文认为裂殖酵母线粒体中可能存在RNA干扰途径,并参与了热激条件下线粒体编码蛋白的表达调控,从而应对热激对其生长以及线粒体功能的影响。本研究为以后进一步探究线粒体RNA干扰与线粒体功能相关研究提供了基础。

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导师 商巾杰
分类号 Q949.326.102
发布时间 2023-09-22(万方平台首次上网日期,不代表论文的发表时间)
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