检索历史 清除

摘要研究背景<br>　　宫颈癌(Cervicalcancer,CC)是全世界女性第四大常见的恶性肿瘤，其公认的主要病因是高危型人乳头瘤病毒(High-riskhumanpapillomavirus,HRHPV)的持续感染。HPV检测的高敏感性及宫颈癌筛查的普及，显著提高了宫颈癌的检出率，但仍有部分患者因HPV检测为阴性而漏诊,其病理类型多为宫颈腺癌(Endocervicaladenocarcinoma,ECA)。2018年，国际宫颈腺癌标准和分类(InternationalEndocervicalAdenocarcinomaCriteriaandClassification,IECC)基于病因学和形态学将ECA分为HPV相关型(HPV-associatedadenocarcinoma,HPVA)和非HPV相关型(Non-HPV-associatedadenocarcinoma,NHPVA)。由于NHPVA发病率低且发病机制尚不明确，目前缺乏针对本病的诊疗方案。近年来,基于大数据共享的生物信息学及基因测序技术的发展，为罕见癌、复发癌的临床诊疗提供了新思路。<br>　　研究目的<br>　　回顾性比较NHPVA与HPVA的临床特点及预后差异，利用生物信息学方法探究二者的差异表达基因，在组织学水平上验证以明确其与NHPVA的预后关系。<br>　　研究方法<br>　　1.临床资料分析:通过检索电子病历数据库收集2010年1月至2020年12月就诊于山东大学齐鲁医院的ECA患者。筛选后复习HE切片，按IECC分为HPVA和NHPVA,回顾性比较两组的临床、病理特征差异，通过Kaplan-Maier及Log-rank检验分析患者总生存期(Overallsurvival,OS)及无病生存期(Disease-freesurvival,DFS),并采用多因素COX回归分析探究影响预后的危险因素。<br>　　2.生物信息学分析:通过高通量基因表达(GeneExpressionOmnibus,GEO)数据库和癌症基因组图谱(TheCancerGenomeAtlas,TCGA)数据库获取数据，进行limma差异分析，基因本体(GeneOntology,GO)、京都基因与基因组百科全书(KyotoEncyclopediaofGenesandGenomes,KEGG)富集分析和在线生存分析，以寻找目的基因。<br>　　3.应用免疫组织化学染色方法探究目的基因在NHPVA与HPVA的表达差异，明确其与NHPVA的预后关系。<br>　　研究结果<br>　　1.NHPVA与HPVA临床资料分析<br>　　1.1本研究共纳入336例ECA患者，其中HPVA组272例,NHPVA组64例（19.05％）。两组患者在年龄、孕产次、临床症状及液基薄层细胞学检测（Thinprepcytologictest,TCT）均无明显差异（P均＞0.05）,且NHPVA的TCT检测灵敏度为60.6％。<br>　　1.2血清学检测中，NHPVA的中性粒细胞/淋巴细胞（Neutrophil-to-lymphocyteratio,NLR）平均值、CA125及CA199阳性率均高于HPVA（P均＜0.05）。<br>　　1.3在病理特征方面,NHPVA的临床分期更高、肿瘤分化程度更低、肿瘤直径（≥4cm）及浸润深度(≥1/2）更大，更易出现淋巴结转移、卵巢及输卵管受累，且NHPVA组的P53阳性率高于HPVA组，而P16阳性率低于HPVA组（P均＜0.05）;多因素Logistic回归分析表明肿瘤分化程度是淋巴结转移的独立危险因素（P＜0.05）。<br>　　1.4生存分析显示NHPVA的3年、5年OS分别是81.2％、69.5％,均低于HPVA组，且NHPVA更易复发（P均＜0.05）;多因素COX回归分析表明肿瘤分化程度及淋巴结转移是影响NHPVA预后的危险因素（P均＜0.05）。<br>　　2.生物信息学分析明确目的基因<br>　　利用limma差异分析筛选出差异基因511个，其中上调基因314个，下调基因197个（P均＜0.05）;GO、KEGG富集分析表明差异表达基因与细胞周期、上皮细胞增殖及细胞粘附等相关;从TCGA数据库中纳入273例患者进行生存分析，通过多因素COX回归分析最终获得目的基因HENMT1和APOBEC3B（P均＜0.05）。<br>　　3.HENMT1的差异表达及其与NHPVA的预后关系<br>　　本研究获得80例患者（32例NHPVA和48例HPVA）的组织切片进行免疫组织化学染色，以染色评分中位数6分为界定义高表达和低表达。结果表明NHPVA组HENMT1高表达者（43.75％）明显低于HPVA组，且HENMT1低表达组患者的OS及DFS更短（P均＜0.05）。<br>　　研究结论<br>　　1.NHPVA与HPVA的部分临床、病理特征存在差异，且NHPVA易复发、预后差;肿瘤分化程度及淋巴结转移是NHPVA预后不良的危险因素。<br>　　2.TCT检测对宫颈腺癌的筛查具有重要价值，其可降低NHPVA的漏诊率。<br>　　3.HENMT1在NHPVA中的表达水平较低，且其低表达与不良预后相关。