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摘要研究背景<br>　　衰老（Aging）是许多疾病的病理基础，大脑是最先发生衰老的器官，海马改变在脑组织中最为显著。基于质谱的定量蛋白组学（Quantitativeproteomics）及磷酸化蛋白组学（Phosphoproteomics）研究可能有助于了解衰老相关的生理变化及特定分子机制，为后续衰老相关标志物提出及抗衰老研究提供线索。<br>　　研究目的<br>　　通过基于质谱技术的4D-Label-free定量蛋白组学及磷酸化蛋白组学分析获得海马组织蛋白组学与磷酸化修饰蛋白组学数据库，筛选衰老相关蛋白与磷酸化修饰蛋白，揭示不同年龄组蛋白成分及含量变化规律，探讨衰老相关机制，提出衰老相关生物标志物。<br>　　研究方法<br>　　1.实验动物分组<br>　　实验动物共9只Sprague-Dawley雌性大鼠按年龄分为A组（2月龄）、B组（12月龄）、C组（24月龄），每组各3只。<br>　　2.蛋白组学及磷酸化蛋白组学分析<br>　　首先提取大鼠右侧海马组织蛋白质，BCA试剂盒检测蛋白浓度，而后将蛋白质酶解成肽段后进行液相色谱-质谱/质谱分析，观察各组蛋白质的表达情况，筛选衰老相关蛋白与磷酸化修饰蛋白，利用生物信息学技术对差异表达蛋白进行进一步功能分析。<br>　　3.血浆生物标志物验证<br>　　采用酶联免疫吸附法（ELISA）对蛋白组学研究结果得到的差异表达BID、DES和PRKCZ蛋白在青年及老年人群血浆中验证。<br>　　研究结果<br>　　1.蛋白组学分析结果<br>　　ABC三组9个样本共检测出5856个可定量的蛋白质。以Foldchange＞2.0倍（上调大于2.0倍或下调＜0.5倍）且Pvalue＜0.05为筛选标准，进行差异表达分析。<br>　　1.1C组与A组相比鉴定到120个差异表达蛋白，其中52个表达上调，68个表达下调。差异表达蛋白主要参与糖胺聚糖生物合成-硫酸乙酰肝素/肝素通路、药物代谢相关通路。由Cytohubba筛选出10种可能与衰老相关的蛋白质:CASP3、MRPL15、MAP2K1、GGT1、GSTM6、CYGB、GFAP、RRAS2、MRPL9、MRPS26。<br>　　1.2C组与B组相比鉴定到44个差异表达蛋白，其中26个表达上调，18个表达下调。差异表达蛋白主要参与P53信号通路、脂质和动脉粥样硬化、动物自噬及癌症相关通路。Cytohubba筛选出7种可能与衰老相关的蛋白质:TRAF6、PTEN、TANK、PRKCZ、FADS2、DHCR7、RHEB。<br>　　1.3B组与A组对比鉴定到116个差异表达蛋白，其中32个上调，83个下调。差异表达蛋白主要参与Notch信号通路，Cytohubba筛选出9种可能与衰老相关的蛋白质:CAMK2A、PPP1CB、CDC5L、RRAS2、ARL15、CAD、SDC4、RARS2、LPP。<br>　　2.磷酸化蛋白组学<br>　　在4051个磷酸化修饰蛋白上有10035条可定量磷酸化肽段，11791个可定量磷酸化位点。<br>　　2.1C组与A组差异磷酸化蛋白进行功能富集分析，GO富集在突触信号传导、细胞骨架蛋白结合等功能中;KEGG富集在胆碱能突触、谷氨酰胺能突触、环境昼夜节律等通路。Cytohubba分析得到DLG4、MAPK1、GRIN2A、SYN1、GNB1、PVALB、GRM1为与衰老相关磷酸化蛋白。<br>　　2.2C组与B组差异磷酸化蛋白进行功能富集分析，GO富集在调节运输、突触后密度等功能;KEGG富集在神经变性通路-多种疾病、谷氨酸能突触、胰岛素分泌、胆碱能突触等通路。Cytohubba分析得到DLG4、DLG2、GRIN2A、GRIN2B、GRIN1为与衰老相关磷酸化蛋白。<br>　　2.3B组与A组差差异磷酸化蛋白进行功能富集分析，GO富集在神经系统发育、肌动蛋白结合等功能;KEGG富集在胆碱能突触、环境昼夜节律、钙信号转导等通路。Cytohubba分析得到DLG4、SRC、MAPK1、PRKACA、GRIN2A、ACTB、SYN1、DYNC1H1、GAPDH、GFAP为与衰老相关磷酸化蛋白。<br>　　3.人衰老相关血浆标志物研究<br>　　检测青年及老年人血浆标本中BID、DES、PRKCZ蛋白浓度变化情况，得出PRKCZ在老年人血浆中显著上调，而BID、DES表达在两年龄组中无明显差异。<br>　　结论<br>　　1.定量蛋白组学筛选出BID、PTEN、CYGB、TANK、PRKCZ、GFAP、CASP3、TRAF6、CAMK2A等可能与衰老相关的蛋白。<br>　　2.磷酸化蛋白组学筛选出DLG4、SYN1、MAPK1、GRIN2A、PRKACA、GFAP等磷酸化蛋白可能与衰老相关。<br>　　3.提出PRKCZ可能作为衰老研究的生物标志物。