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摘要研究背景<br>　　子宫自内而外依次为内膜层、肌层和浆膜层。其中子宫内膜主要由随激素周期性变化的功能层和无周期性改变的基底层组成，主要含有上皮和基质两种细胞成分。肌层较厚，自内向外大致可分为粘膜下层，中间层和浆膜下层。主要由平滑肌细胞构成。对子宫原代细胞的体外分离与培养可以体外建立模型研究子宫相关疾病，是许多体外实验的基础。传统二维(Two-Dimensional,2D)细胞培养方式局限较大，虽然可以短时间获得大量细胞，但难以模拟细胞体内生长的微环境和细胞之间的空间作用，研究只能局限于细胞水平，已经越来越难以满足体外研究需要。近年来三维(Three-Dimensional,3D)细胞培养迅速发展，在肿瘤微环境、类器官、药物研发等领域具有广泛应用价值。对细胞进行体外三维模式培养可以有效模拟细胞在空间的迁移、生长、信息交流等，更贴近于子宫在机体内的环境，且可以通过改变相关因子研究相关疾病的病理生理或者药理机制。子宫细胞的三维培养在研究子宫相关疾病如宫腔粘连(Intrauterineadhesion,IUA)、腹膜播散型平滑肌瘤(Leiomyomatosisperitonealisdisseminate,LPD)、子宫内膜异位症(Endometriosis,EMT)、子宫腺肌病(Adenomyosis,AM)等领域拥有广泛的应用前景。将细胞培养在具有特定空间结构的支架上进行培养是细胞三维培养的常用方法。明胶/聚已内酯(Gelatin/Polycaprolactone,GT/PCL)梯度生物膜拥有足够强的机械强度，良好的生物相容性，无细胞毒性，还有防细胞侵袭浸润等优势，已在心脏、软骨、皮肤等领域进行了体外的细胞培养并应用于组织工程技术研究。因而我们认为该支架材料在子宫细胞的培养中也可以发挥作用。<br>　　研究目的<br>　　体外分离子宫内膜细胞、子宫平滑肌细胞并与支架进行共培养，探究以GT/PCL梯度生物膜支架作为载体三维培养子宫细胞的可行性。<br>　　研究方法<br>　　体外分离人子宫平滑肌细胞(Humanuterinesmoothmusclecells,HSMC)、子宫内膜细胞包括子宫内膜基质细胞(Humanendometrialstromalcells,HESC)、子宫内膜腺上皮细胞(Humanendometrialglandularepithelialcells,HEEC)原代细胞并进行体外培养和传代，选取第二代细胞进行细胞鉴定以及细胞生长曲线测定。将细胞接种于GT/PCL梯度生物膜支架上培养，并于培养后4h采用细胞计数仪计数估算细胞黏附率，于培养后12小时进行双光子显微镜拍摄观察细胞的黏附情况;采用cck-8试剂盒测定细胞在支架上的活性;将细胞在支架材料上培养于第一天和第四天分别对细胞-支架复合物进行SEM电镜拍摄，免疫荧光法测定细胞在支架上培养四天后标志蛋白αactin、vimentin、cytokerotin18蛋白表达，以观察细胞在支架上的黏附和生长情况，评估GT/PCL梯度层生物膜作为子宫细胞体外三维培养支架的可行性。<br>　　研究结果<br>　　扫描电镜显示GT作为变性胶原通过静电纺丝技术丝处理，形成类似于体内细胞外基质(ExtracellularMatrix,ECM)的随机但规则的纤维网状结构，这些纤维网络有利于细胞的黏附。本实验成功体外分离培养并鉴定了原代子宫内膜腺上皮细胞、子宫内膜基质细胞、子宫平滑肌细胞，接种于GT/PCL梯度层生物膜上后细胞能长时间保持活性并增殖，细胞之间可见复杂的网状结构，这可能是细胞之间建立了空间上的信息交流;细胞并不局限于支架表面，也可以向支架内部生长，因而支架材料可以为细胞生长提供三维空间，更好的模拟细胞在体内的生长环境。免疫荧光结果显示，细胞在支架上培养四天后αactin、vimentin,cytokerotinl8阳性，表明三种细胞仍保持自身特性。GT/PCL梯度生物膜支持细胞的黏附增殖且不改变细胞本身特性，具备作为子宫细胞体外三维培养支架的条件。<br>　　结论<br>　　GT/PCL梯度生物膜支架可以通过静电纺丝技术体外模拟细胞在肌体内的空间微环境，子宫内膜细胞、子宫平滑肌细胞均可在GT/PCL梯度生物膜支架材料上黏附并良好生长，细胞之间建立可能建立了相互联系的信息交流网，且自身特性并未发生改变。以GT/PCL生物膜支架为载体体外三维培养子宫细胞进而设计相关疾病模型是可行的。