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摘要研究背景:蓝斑(Locuscoeruleus,LC)是脑干内的重要神经核团，呈楔形，位于第四脑室底，界沟上端的外侧，其内的神经元以去甲肾上腺素能神经元为主。蓝斑发出的纤维极为丰富，几乎遍布整个中枢神经系统，其目标区包括脊髓、脑干、小脑、下丘脑、杏仁核以及大脑皮质等。蓝斑功能复杂，参与呼吸、睡眠、觉醒、认知、注意、情绪等生理功能，且与神经退行性疾病和精神疾病密切相关。<br>　　阿尔茨海默病(Alzheimer''sdisease,AD)是以进行性认知功能障碍和精神行为损害为特征的神经退行性病变，主要表现为记忆、思维、空间定向和语言障碍，以及情感紊乱。Braak等人发现蓝斑及其发出的纤维束与AD的发病机理有关，AD患者在出现认知障碍和其他临床症状之前，蓝斑内就出现Tau蛋白沉积和神经原纤维缠结，且蓝斑会随着疾病的严重程度，逐渐萎缩变性，这些病理改变能够损伤蓝斑投射到大脑皮质的神经环路，导致AD的前驱期患者出现睡眠改变、精神行为症状和抑郁情绪等非认知缺陷。研究证实内嗅皮质(Entorhinalcortex,EC)、海马(Hippocampus,Hip)和杏仁核(Amygdala,Amy)是AD患者大脑内较早发生病理改变的区域，它们在AD进程中发挥重要作用。有学者使用逆行示踪技术探索了蓝斑至不同脑区投射神经元的分布特点，发现蓝斑内神经元分布具有一定的规律。但是蓝斑至内嗅皮质、海马等AD相关脑区的投射神经元分布特点尚不明确。此外，研究表明增强或保护神经环路的完整性可以有效改善AD患者的认知障碍。但是目前针对AD中蓝斑神经环路的研究仍不完善,这将不利于AD治疗的发展。<br>　　基于以上背景，本研究选取了与AD早期病变相关的内嗅皮质、杏仁核与海马三个脑区为感兴趣脑区，利用逆行示踪和透射电镜成像等技术研究蓝斑至内嗅皮质、杏仁核与海马投射神经元的分布特点。并且对正常小鼠和AD小鼠的神经环路进行对比观察,分析AD小鼠的蓝斑-内嗅皮质、蓝斑-杏仁核及蓝斑-海马神经环路的改变情况，以期从神经环路的角度探索AD的发病机制，为AD的治疗提供解剖学参考。本研究包括两部分:1.蓝斑投射神经元的分布特点;2.阿尔茨海默病小鼠中蓝斑神经环路的改变。<br>　　第一部分:蓝斑投射神经元的分布特点<br>　　目的:揭示蓝斑至内嗅皮质、杏仁核与海马投射神经元的分布特点，为研究蓝斑的结构和功能提供神经环路水平上的解剖基础。<br>　　方法:使用脑立体定位技术将逆行示踪病毒精准注射到不同小鼠的左侧内嗅皮质、杏仁核与海马中。待病毒转染2周后，行酪氨酸羟化酶免疫荧光染色，通过全景数字切片扫描显微镜获取蓝斑冠状面图像。对蓝斑内逆行标记神经元的空间分布进行定量分析，以确定蓝斑至内嗅皮质、杏仁核与海马投射神经元的分布特点。<br>　　结果:<br>　　(1)蓝斑至内嗅皮质投射神经元分布于蓝斑吻-尾之间;其中93.68％分布于注射部位同侧，6.32％分布于注射部位对侧，倾向于同侧分布;87.35％分布于蓝斑背侧，12.65％分布于蓝斑腹侧，倾向于背侧分布;50.99％分布于蓝斑内侧，49.01％分布于蓝斑外侧，内/外侧分布较均匀。<br>　　(2)蓝斑至杏仁核投射神经元分布于蓝斑的吻-尾之间;其中92.64％分布于注射部位同侧，7.36％分布于注射部位对侧，倾向于同侧分布;87.98％分布于蓝斑背侧，12.02％分布于蓝斑腹侧，倾向于背侧分布;53.88％分布于蓝斑内侧，46.12％分布于蓝斑外侧，内/外侧分布较均匀。<br>　　(3)蓝斑至海马投射神经元分布在蓝斑的吻-尾之间;其中86.15％分布于注射部位同侧，13.85％分布于注射部位对侧，倾向于同侧分布;91.94％分布于蓝斑背侧，8.06％分布于蓝斑腹侧，倾向于背侧分布;53.15％分布于蓝斑内侧，46.85％分布于蓝斑外侧，内/外侧分布较均匀。<br>　　(4)经比较发现，蓝斑至内嗅皮质、杏仁核与海马投射神经元存在相似的分布特点。它们均分布于蓝斑的吻-尾之间;虽分布于双侧的蓝斑内，但更倾向分布于注射部位同侧的蓝斑内;均倾向分布于蓝斑背侧，仅有不到13％的神经元分布于蓝斑腹侧;在蓝斑内/外侧分布较均匀。<br>　　结论:本研究对蓝斑至内嗅皮质、杏仁核与海马投射神经元的空间分布进行了定量分析，揭示了它们在蓝斑内的分布特点，对蓝斑结构和功能的研究具有重要意义。<br>　　第二部分:阿尔茨海默病小鼠中蓝斑神经环路的改变<br>　　目的:揭示AD小鼠中蓝斑-内嗅皮质、蓝斑-杏仁核及蓝斑-海马神经环路的改变情况，为AD的发病机制研究及治疗提供形态学依据。<br>　　方法:繁育5×FAD小鼠作为AD小鼠模型。使用逆行示踪病毒追踪蓝斑-内嗅皮质、蓝斑-杏仁核及蓝斑-海马神经环路，并利用透射电镜技术观察蓝斑突触结构，以分析这三条神经环路在正常小鼠与AD小鼠的改变情况。<br>　　结果:与正常小鼠相比，5×FAD小鼠中的这三条神经环路均出现不同程度的受损,其中蓝斑-内嗅皮质神经环路受损程度为40.36％;蓝斑-杏仁核神经环路受损程度为40.44％;蓝斑-海马神经环路受损程度为62.75％;镜下观察蓝斑的突触结构也存在损伤。<br>　　结论:本研究利用逆行示踪和透射电镜成像等技术分析了AD小鼠中蓝斑-内嗅皮质、蓝斑-杏仁核及蓝斑-海马神经环路的改变情况。对AD的发病机制研究及治疗具有重要指导作用。<br>　　总结:本研究选取与AD早期病变相关的内嗅皮质、杏仁核与海马三个脑区为感兴趣脑区展开研究，发现蓝斑至内嗅皮质、杏仁核与海马投射神经元的分布特点类似，为探究蓝斑结构和功能提供了解剖学基础。此外利用逆行示踪和透射电镜成像等技术观察AD小鼠的蓝斑-内嗅皮质、蓝斑-杏仁核及蓝斑-海马神经环路，发现它们均存在不同程度的损伤。本研究有助于揭示AD发病的神经环路机制，并为其治疗提供解剖学依据。