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摘要背景:<br>　　胃癌是全球最常见的恶性肿瘤之一。胃癌早期起病隐匿、不易发觉，待到出现症状就医后确诊，大多已处在中晚期并伴有远处转移。由于胃癌目前缺乏有效的治疗手段，从而导致患者预后不良且易复发转移。肿瘤进展是一个复杂的过程,肿瘤细胞异常的生物学行为涉及多种信号通路和多种基因的改变。因此，深入了解和研究去泛素化酶对于胃癌的调控机制有助于寻找新的肿瘤标志物，对胃癌诊断、为患者提供个性化治疗具有重要意义。近年的研究表明，去泛素化酶(DUB)在肿瘤的发生和进展发挥重要调控作用。泛素化修饰是一个可逆的过程，去泛素化酶可以水解泛素分子与底物蛋白之间的连接，其表达调控异常对于肿瘤的发生发展具有驱动作用。三基序蛋白44(TripartiteMotifContaining44,TRIM44)其结构中含有锌指结构调控底物蛋白泛素化修饰，对蛋白稳定性发挥重要作用。目前的研究表明，TRIM44在多种肿瘤中表达，参与影响肿瘤的进展并与预后不良相关。然而，TRIM44在胃癌中的调控机制以及对于胃癌预后的影响尚不明确。<br>　　方法:<br>　　本研究前期借助TCGA数据库初步分析比较了TRIM44在胃癌病例中癌与癌旁的表达情况，绘制生存曲线并进行了单因素、多因素生存回归分析。利用胃癌样本进行实时荧光定量PCR(RT-qPCR)验证TRIM44表达情况;利用免疫组化技术验证TRIM44在胃癌病例的表达情况。<br>　　通过Transwell小室细胞迁移实验、CCK8细胞增殖实验等，探索TRIM44表达对于胃癌细胞生物学效应的影响。<br>　　通过CO-IP实验联合质谱分析，筛选TRIM44的底物蛋白;通过CO-IP实验、免疫荧光共定位、westernblot验证TRIM44与其底物蛋白的相互作用。<br>　　借助共聚焦显微镜观察TRIM44表达变化对线粒体形态的影响，同时观察到受TRIM44调控的底物蛋白与线粒体的定位情况。<br>　　通过乳酸生成实验、ATP生成实验和OCR耗氧率实验验证肿瘤细胞的代谢转换情况。Westernblot实验验证TRIM44对于下游靶基因的调控以及发生代谢转换。<br>　　通过TCGA数据库分析，TRIM44存在启动子区甲基化修饰并预测了甲基化位点。利用甲基化抑制剂5-Azacytidine以及westernblot实验确定介导TRIM44启动子区甲基化修饰的甲基转移酶。<br>　　结果:<br>　　(1)TRIM44在胃癌组织中的表达情况以及临床病理意义<br>　　TRIM44在胃癌组织中表达上调，TRIM44高表达的患者预后较差、生存期短。<br>　　(2)TRIM44促进胃癌细胞的迁移与增殖能力<br>　　体外细胞功能实验表明，TRIM44表达上调增强胃癌细胞的迁移、增殖能力。<br>　　(3)TRIM44通过调控TRAP1泛素化修饰稳定其蛋白表达<br>　　TRIM44与TRAP1共同定位于细胞质中且相互作用。TRIM44发挥去泛素酶作用移除TRAP1泛素化修饰，从而稳定其蛋白水平。<br>　　(4)TRIM44调控线粒体形态并促进胃癌细胞迁移;<br>　　TRIM44调控DRP1导致线粒体分裂、稳定TRAP1影响线粒体功能使有氧糖酵解成为肿瘤细胞主要代谢形式，并且线粒体分裂增强胃癌细胞迁移能力。<br>　　(5)DNA甲基化修饰参与调控TRIM44转录<br>　　TRIM44存在启动子区甲基化，甲基转移酶DNMT1参与DNA甲基化调节TRIM44转录。<br>　　结论:<br>　　1.TRIM44在胃癌组织中高表达且与患者预后不良有关。<br>　　2.TRIM44表达增强胃癌细胞增殖能力。<br>　　3.TRIM44调控TRAP1泛素化稳定其蛋白表达。<br>　　4.TRIM44诱导线粒体分裂增强胃癌细胞迁移能力，同时有氧糖酵解成为细胞内主要代谢形式。<br>　　5.甲基转移酶DNMT1参与DNA甲基化调控TRIM44转录。