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摘要龋病是一种非常独特的硬组织疾病，因为牙釉质没有细胞和血管，与其它组织相比，不能通过细胞机制而自我修复，必须通过一个物理化学过程（再矿化）才能修复。研究证实，细胞外基质蛋白控制着牙釉质晶体的发生、成长和机化。Amelogenin就是其中重要的牙釉质基质蛋白之一。我们前期研究证实重组Amelogenin多肽（由N端和C端构成）具有促进早期釉质龋再矿化的作用。但研究发现，发育期牙釉质基质中全长Amelogenin含量不足10％,其余大多为酶解片段。故我们推测含有Amelogenin唯一磷酸基团（位于S-16丝氨酸）的TRAP片段可能在Amelogenin调节早期釉质龋再矿化过程中有着重要作用。<br>　　目的<br>　　1.在前期研究的基础上初步研究重组Amelogenin多肽TRAP促进早期釉质龋再矿化的作用，以明确Amelogenin促进釉质龋损再矿化的功能片段，为研发一种安全、有效、非氟的再矿化防龋制剂提供实验依据。<br>　　2.测定Ca2+与重组Amelogenin多肽TRAP的结合性能，初步探讨重组Amelogenin多肽TRAP促进早期釉质龋再矿化的机制，为多肽TRAP促进釉质龋再矿化作用提供理论基础。<br>　　方法<br>　　1. 选择表面无裂纹、无龋洞、无白垩色病变、无釉质发育异常的牛切牙，制备成3 mm × 3 mm × 2 mm大小的釉质块，唇面釉质磨平、抛光，去除表层污染。然后制备成人工釉质龋样品。将48个釉质龋样品随机分配到4组（12个/组）溶液中再矿化12天:A组，再矿化溶液（空白对照）;B组，100μg/mL重组Amelogenin多肽（由Amelogenin N端和C端构成）+再矿化溶液;C组，100 μg/mL重组Amelogenin多肽TRAP +再矿化溶液;D组，2 ppm NaF +再矿化溶液（阳性对照）。再矿化后采用微计算机断层扫描（Microfocus X-ray computed tomography,Micro-CT）测量样品再矿化前、后的矿物质丢失量和龋损深度，比较各组再矿化后矿物质获得量和龋损深度变化。使用扫描电镜（Scanning electron microscopy,SEM）观察样品处理前后的纵断面形态结构变化。利用X射线微衍射仪（X-ray microdiffractometer,XRD）检测样品再矿化后生成物晶体物相。<br>　　2. 运用等温滴定量热仪（Isothermal titration calorimeter,ITC）,在 T=37℃、pH=7条件下，将12.5 mmol/L的CaCl2溶液以350 r/min的速率逐次滴入到0.42 mmol/L的重组Amelogenin多肽TRAP溶液中，并同时与空白对照滴定热量进行对比。利用仪器自带软件作图分析并测量重组Amelogenin多肽TRAP和Ca2+之间的解离常数（Kd）、结合常数（Ka）、反应焓（ΔH）和反应熵（ΔS）。<br>　　结果<br>　　1. Micro-CT结果示，四组样品再矿化后，A组的矿物质获得量和龋损深度变化均最小（P＜0.05）;D组的矿物质获得量和龋损深度变化均最大（P＜0.05）;C组和B组的矿物质获得量和龋损深度变化均大于A组矿物质获得量和龋损深度变化（P＜0.05）,但均小于D组矿物质获得量和龋损深度变化（P＜0.05）;C组和B组之间比较矿物质获得量和龋损深度变化，差异均不具有统计学意义（P＞0.05）。SEM结果显示，样品脱矿后釉柱结构溶解，釉柱之间间隙增大。再矿化后，四组样品的釉柱和釉柱间质均见不同程度新形成的矿化物沉积。与A组相比，B、C和D组再矿化后的釉柱结构较为规则、明显。XRD结果示，四组釉质龋样品再矿化后生成的物质是羟基磷灰石晶体。与A组相比，B、C和D组生成的羟基磷灰石晶体结晶度增加。C与B两组比较，生成的羟基磷灰石晶体结晶度相近。<br>　　2.重组Amelogenin多肽TRAP与Ca2+的解离常数、结合常数、反应焓和反应熵等参数值均有两种，因此两者之间存在两种结合方式。第一种结合方式参数值:Kd1=1.000 ×10-1M,Ka1=10M-1,ΔH1=106.4KJ/mol,ΔS1=3.760 × 102 J/mol·K。第二种结合方式参数值:Kd2=1.803 × 10-6M,Ka2=5.548 × 105M-1,ΔH2=-106.6 KJ/mol,ΔS2=-2.474 × 102 J/mol·K。<br>　　结论<br>　　1.重组Amelogenin多肽TRAP具有促进早期釉质龋再矿化的作用，其再矿化作用与我们前期研究的重组Amelogenin多肽（由Amelogenin N端和C端构成）促进釉质龋再矿化作用相同，说明其可能是Amelogenin促进釉质龋损再矿化过程中的重要功能片段。<br>　　2.重组Amelogenin多肽TRAP具有与钙离子结合的能力，为探明其促进早期釉质龋再矿化作用机制提供了依据。