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摘要黑色素瘤是源于黑色素细胞的高度恶性肿瘤，转移性强，预后较差。近年来恶性黑色素瘤的发病率正在逐渐升高，大约10％患者在首次诊断时就已经发展为晚期转移性黑色素瘤。目前FDA批准用于临床不能手术切除治疗的Ⅲ期或晚期转移性黑色素瘤的治疗方法主要包括化疗、靶向治疗和免疫治疗等，但是这些治疗存在着毒副作用大、耐受性差、响应率低等问题。因此，寻找新靶点和药物仍是转移性黑色素瘤治疗的关键。<br>　　组蛋白赖氨酸特异性去甲基化酶1(Histonelysine-specificdemethylase1,LSD1)是第一个被发现的组蛋白去甲基化酶，已被许多研究证实在多种实体瘤中异常高表达，且促进肿瘤迁移、侵袭和上皮-间充质转化(Epithelial-MesenchymalTransition,EMT)。另外，我们课题组前期研究发现LSD1抑制剂ORY-1001可下调非小细胞肺癌细胞Yes相关蛋白(Yes-associatedprotein,YAP)表达，而YAP已被证实与许多肿瘤生长和转移密切相关。基于此，本课题探究LSD1在黑色素瘤转移中的作用，并基于YAP探究LSD1调控转移的分子机制。主要研究结果如下:<br>　　(1)靶向抑制LSD1在体外和体内水平抑制黑色素瘤转移。<br>　　在黑色素瘤细胞B16和A875中转染LSD1siRNA或用LSD1抑制剂ORY-1001处理，WesternBlot实验、细胞划痕试验和Transwell试验结果显示，抑制LSD1能显著抑制黑色素瘤细胞EMT和迁移;进一步用B16细胞尾静脉注射构建小鼠肺转移模型，对肺和肝上的转移结节进行计数统计，在体内水平进一步证实ORY-1001的抗黑色素瘤转移作用。<br>　　(2)LSD1通过调控YAP表达影响黑色素瘤细胞EMT和迁移。<br>　　WesternBlot实验发现ORY-1001以浓度依赖性增加黑色素瘤细胞中YAP磷酸化水平，降低YAP蛋白表达。WesternBlot实验、细胞划痕试验和Transwell试验结果发现敲低YAP显著抑制黑色素瘤细胞EMT和迁移。过表达YAP显著促进黑色素瘤细胞EMT和迁移，并能逆转ORY-1001对黑色素瘤细胞EMT和迁移的抑制作用。因此，LSD1是通过调控YAP表达影响黑色素瘤细胞EMT和迁移的。<br>　　(3)LSD1通过Hippo通路调控YAP表达。<br>　　蛋白酶体抑制剂MG132作用发现LSD1对YAP的调控受泛素-蛋白酶体降解途径的影响。核质分离后，WesternBlot实验结果显示，ORY-1001显著抑制YAP入核。qPCR实验发现ORY-1001对YAP转录水平没有影响，说明ORY-1001下调YAP不是通过转录水平而是通过使YAP磷酸化后降解。WesternBlot实验进一步表明ORY-1001激活了Hippo信号通路，LATS1、LATS2蛋白表达上调。因此，LSD1可能通过Hippo信号通路调控YAP表达。<br>　　(4)LSD1通过NF2-Hippo-YAP信号通路影响黑色素瘤转移。<br>　　WesternBlot实验发现ORY-1001和敲低LSD1均能上调Hippo信号通路上游NF2蛋白表达。敲低NF2抑制了Hippo信号通路的激活，导致LATS1和LATS2表达下调以及YAP表达上调，并能逆转ORY-1001对Hippo信号通路的激活作用。因此，LSD1是通过NF2调控Hippo通路的。WesternBlot实验、细胞划痕试验和Transwell试验结果显示，敲低NF2显著促进黑色素瘤细胞EMT和迁移，并能逆转ORY-1001对黑色素瘤细胞EMT和迁移的抑制作用。因此，LSD1抑制剂ORY-1001是通过上调NF2来激活Hippo信号通路，促进YAP磷酸化后降解，从而抑制黑色素瘤转移的。<br>　　综上所述，靶向抑制LSD1可通过上调NF2表达，激活Hippo信号通路,促进YAP磷酸化后降解，从而抑制黑色素瘤转移。