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摘要目前，龋病原位模型(In situ models)在龋病防治的基础和应用研究中作为一种有效的实验工具已得到广泛的认可，原位研究采用龋病原位模型突出了在生理条件下研究防龋制剂再矿化效果的优势，在龋病防治的临床研究和高度控制的实验室研究之间起到桥梁的作用。研究证明，细胞外基质蛋白控制着牙釉质晶体的发生、成长和机化。而釉质细胞外基质蛋白主要由Amelogenin与其裂解产物组成，大约占釉质基质的90％多。我们前期体外研究发现重组Amelogenin多肽TRAP能够促进早期牙釉质龋损的再矿化。但由于研究体系的局限，尚不能认为具有普遍性，因此需要更多的实验结果予以支持。<br>　　目的：<br>　　1.首先分析重组Amelogenin多肽TRAP与羟基磷灰石和脱矿牙釉质表面的结合能力，为接下来的原位研究提供理论前提。<br>　　2.在前期体外实验的基础上，采用龋病原位模型，进一步研究重组Amelogenin多肽TRAP在口腔环境下对早期釉质龋的再矿化作用。为研发一种安全、有效、非氟的再矿化防龋制剂提供实验依据。<br>　　方法：<br>　　1.①将重组Amelogenin多肽TRAP溶解于10mmol/L羟乙基哌嗪乙硫磺酸（N-2-hydroxyethylpiperazine-N-ethane-sulphonicacid,HEPES）溶液（pH=7.4）中，加入5mg羟基磷灰石（Hydroxyapatit,HA）粉末混合，37℃下旋转过夜后,以14000rpm离心10min得到上清液，使用BCA蛋白检测试剂盒测试上清液中多肽TRAP的浓度，并根据Langmuir公式生成线性吸附线，分析多肽TRAP对羟基磷灰石吸附位点的亲和力和多肽TRAP在每平方米羟基磷灰石上的最大吸附位点。②将24个牛牙釉质块（3mm×3mm×1mm）随机分为4组（n=6块/组）,DDW（去离子水）组:A1.正常牛牙釉质组,A2.脱矿牛牙釉质组;FITC-TRAP（荧光剂FITC标记的重组Amelogenin多肽TRAP）组:B1.正常牛牙釉质组，B2.脱矿牛牙釉质组。其中脱矿的牛牙釉质块用37％的磷酸酸蚀脱矿45s,于去离子水下冲洗1min。将DDW和FITC-TRAP分别滴在釉质块表面（100μL/块）,30min后于去离子水下冲洗3次，自然干燥，采用激光共聚焦扫描显微镜（Confocal laser scanning microscope,CLSM）观察各组牛牙釉质块的荧光分布情况。<br>　　2.选取新鲜拔出的牛切牙，分离冠根，沿牙冠部切成4mm×4mm×2mm大小的釉质块，于体式显微镜下选择无龋齿、无裂缝、无牙釉质畸形的牛牙釉质块样品，釉质表面磨平、抛光,形成一个平坦且无污染的表面，采用维式（Vicker）显微硬度仪测试正常釉质表面显微硬度值（Surface microhardness,SH）SH0。然后制备成人工釉质龋样品，采用维式（Vicker）显微硬度仪测试脱矿后釉质表面显微硬度值SH1。将36个釉质龋样品随机分为3组（n=12块/组）:A组:去离子水组（阴性对照组）;B组:重组Amelogenin多肽TRAP组（100μg/mL）;C组:2ppm氟化钠组（阳性对照组）。然后进行原位实验，实验进程分为3个阶段，每阶段持续14天，之间间隔7天为洗脱期。每个阶段12名参与者佩戴载有釉质块的可摘戴原位装置，于三餐后取出，用1.5mL实验试剂处理釉质样品3min后佩戴回口腔中。原位实验结束后，采用维式（Vicker）显微硬度仪测试再矿化后釉质表面显微硬度值SH2;采用努式（Knoop）显微硬度仪测试横截面显微硬度值（Cross-sectional micro-hardness,CSH）。<br>　　结果：<br>　　1.①重组Amelogenin多肽TRAP与HA吸附位点的亲和力K为259.67mL/μmol,最大吸附位点数N为11.12×10-2μmol/m2。②FITC-TRAP处理后的釉质样品均可以检测出荧光，且与正常釉质样品相比，脱矿釉质样品的荧光分布更强烈。<br>　　2.原位实验后表面显微硬度结果显示，实验各组均能提高脱矿釉质表面显微硬度（P＜0.05）。由表面显微硬度恢复率（SHR％）来看，B组低于C组，但明显高于A组（P＜0.05）。原位实验后表层下综合横断面显微硬度（IH）结果显示，A组IH为40553,B组IH为43462.5,C组IH为48469,B组与C组均明显高于A组（P＜0.05）。但表层下综合硬度变化（△IHC％）结果显示，B组△IHC％为6.73,C组△IHC％为15.68,B组低于C组（P＜0.05）。<br>　　结论：<br>　　1.重组Amelogenin多肽TRAP具有与羟基磷灰石、脱矿的釉质表面结合的能力，为原位实验提供了理论前提。<br>　　2.重组Amelogenin多肽TRAP在龋病原位模型中可促进早期釉质龋的再矿化，为其作为一种安全、有效、非氟再矿化防龋制剂的研发提供了实验依据。