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摘要目的：社会老龄化不断发展使我国心力衰竭的患病人数逐年上升。心衰患者5年生存率低于50％,心功能持续下降，并表现出呼吸困难、乏力水肿等,生活水平大受影响。心室重构会伴随并加重心衰的进程，它主要表现为病理性心肌肥厚和心肌纤维化的发展。延缓心衰的进程一直是研究热点，靶向心肌纤维化的进程对于提高临床诊断率和抑制心衰发展意义重大。本实验室前期研究发现,组蛋白赖氨酸特异性去甲基化酶LSD1在扩张型心肌病以及主动脉弓缩窄小鼠心脏中高表达，心肌成纤维细胞特异性敲除LSD1可以明显改善TAC小鼠心脏功能。因此靶向LSD1设计新型安全的小分子化合物，以延缓心脏纤维化进程，对于临床有重要意义。本课题通过筛选48个苯环丙胺类化合物得到体内外靶向性、安全性高的化合物5,并在体内外验证了其抑制心肌重塑和纤维化的作用及机制。<br>　　方法：1、细胞实验：通过均相时间分辨荧光分析(HTRF技术)体外虚拟筛选评价化合物体外对LSD1的酶活性的抑制效率;MTT实验检测化合物对NRCFs和NRCMs的毒性;CETSA实验验证化合物是否可以靶向结合LSD1蛋白;免疫荧光实验(IF)表征化合物对α-SMA荧光强度的影响;Western Blot检测化合物对蛋白表达的影响、伤口愈合实验和Transwell实验验证化合物对NRCFs增值迁移能力的影响。2、动物实验：急性毒性实验验证化合物在小鼠体内的安全性;药代动力学实验(PK)分析化合物在体内的过程;构建主动脉弓缩窄小鼠模拟压力超负荷诱导的心衰发展，给予小鼠不同浓度化合物作用TAC小鼠12周，通过心脏超声、心重指数、肺重指数、心脏病理检测、Western Blot等多方面评价化合物抗TAC诱导的心肌重塑和纤维化的作用。<br>　　结果：通过HTRF技术对黄利华课题组合成的48个化合物，得到体外抑制LSD1酶活性IC50低于10nM化合物共6个，MTT实验确定化合物5体外酶活性半数抑制率为8.3nM,20μM作用NRCFs和NRCMs48h,两种细胞的存活率均在85％以上。CETSA表明与阴性对照5-N组和溶剂DMSO组相比化合物5可靶向结合LSD1,并抑制LSD1蛋白降解;IF实验、伤口愈合实验、Transwell实验和Western Blot实验表明化合物5有效抑制AngⅡ诱导的NRCFs活化，抑制NRCFs的增殖迁移，降低纤维化相关蛋白CollagenⅠ、CollagenⅢ和α-SMA的表达，上调LSD1蛋白下游H3K4me2和H3K9me2的表达，其机制可能与TGF-β1/Smad2/Smad3通路有关。急性毒性实验表明化合物5短期对小鼠内脏无损伤，有良好的安全性;PK实验结果表明化合物在大鼠体内有良好的药代动力学特质，口服T1/2为1.84h,口服生物利用度达85.0％;心脏超声结果表明化合物530mg/kg/d可明显改善TAC小鼠心脏的收缩舒张功能;心重指数和肺重指数表明化合物5可显著改善TAC小鼠心衰和肺水肿、心脏病理检测表明化合物5可明显改善TAC小鼠心脏的纤维化和心肌损伤;Western Blot实验表明化合物5可明显抑制TAC小鼠心脏中纤维化和肥厚相关蛋白的表达，上调LSD1下游底物水平，可能是通过抑制TGF-β1/Smad2/Smad3通路激活有关。<br>　　结论：本课题发现了结构全新的化合物5,体外抑制LSD1酶活性IC50=8.3nM,具有良好的安全性和靶向性，可有效抑制AngⅡ诱导NRCFs活化;在体内具有良好的安全性和药代动力学参数，口服半衰期为1.84h,生物利用度85％;可有效对抗TAC诱导的心肌重塑和纤维化，这可能与抑制TGF-β1/Smad2/Smad3通路激活有关。