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摘要研究背景<br>　　慢性肾脏病是由各种原因引起的慢性肾脏结构和功能障碍，具有病程长、病因复杂、治疗手段缺乏等特点，被认为是人类健康的重大威胁。纤维化是慢性肾脏病的常见病理表现和重要驱动因素，机体受到严重或反复损伤时，正常的组织修复可演变为进行性纤维化，细胞外基质(ECM)过度积累，导致器官功能障碍，最后导致终末期肾病乃至死亡。已有研究证实肾脏纤维化与肾小管上皮细胞(TEC)损伤后的适应不良性修复有关，但参与此过程的关键分子及其作用机制尚未被完全揭示，亟需进一步研究。<br>　　环状RNA(circRNA)是一类在真核生物中广泛表达的非编码RNA,其环状结构耐受核酸外切酶的降解，可以在体内相对稳定存在，同时circRNA的表达具有较强的组织特异性和细胞特异性，因此被认为是理想的潜在生物标志物。近期文献表明，circRNA参与了器官纤维化的调节，但调节肾损伤后纤维化的circRNA分子及其作用机制仍缺乏研究。<br>　　本课题拟探讨circRNA对肾脏纤维化的调节作用及其机制，旨在为慢性肾脏病诊治提供新思路。<br>　　研究方法<br>　　一、肾损伤后纤维化相关circRNA的筛选和鉴定<br>　　1、构建小鼠肾脏缺血-再灌注损伤模型，高通量测序筛选出差异表达显著的circRNA,即circBNC2。<br>　　2、检测circBNC2在小鼠各组织中的表达量，鉴定其组织特异性。<br>　　3、放线菌素D实验与RNA酶实验，鉴定circBNC2稳定性。<br>　　4、核质分离与Northernblot实验，检测circBNC2细胞定位。<br>　　二、circBNC2抑制损伤后人类TEC的细胞周期停滞和纤维化<br>　　1、基因组学分析circBNC2功能，其可能参与细胞周期调节。<br>　　2、构建TEC的circBNC2过表达和敲除模型，进行细胞缺氧损伤和马兜铃酸损伤实验。<br>　　3、利用流式细胞术、免疫荧光、Westernblot等方法检测细胞周期和纤维化相关指标，验证circBNC2对细胞周期的影响。<br>　　三、circBNC2抑制小鼠肾损伤后纤维化<br>　　1、构建小鼠的circBNC2过表达和敲除模型，进行缺血-再灌注肾损伤和马兜铃酸肾损伤实验。<br>　　2、利用Westernblot和病理染色，检测细胞周期和纤维化相关指标。<br>　　研究结果<br>　　1、circBNC2在损伤后的小鼠肾组织中表达显著下调，其具有稳定的环状结构，在肾组织中特异性表达，主要定位于TEC细胞质。<br>　　2、circBNC2能抑制损伤后TEC的G2/M细胞周期停滞。<br>　　3、circBNC2能抑制小鼠肾损伤后的促纤维化因子分泌和G2/M细胞周期停滞，减轻肾脏纤维化程度。<br>　　结论<br>　　circBNC2通过抑制TEC的G2/M细胞周期停滞，减轻肾损伤后纤维化。