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摘要背景：<br>　　输血相关急性肺损伤(Transfusion-related acute lung injury,TRALI)是指患者在接受输血后6小时内出现明显的呼吸困难和缺氧，极端情况下甚至会导致生命危险。目前关于TRALI发生发展过程中的病理生理学机制仍存在争议，且临床尚无特异性的疗法。本研究旨在通过转录组测序和生物信息学分析的方法,探讨TRALI的病理生理学机制,通过转录组测序技术挖掘疾病潜在的关键基因。该研究建立了 CD36抗体介导的TRALI小鼠模型，对小鼠肺组织进行转录组测序，分析显著性差异基因并进行后续验证，以期为深入研究TRALI的机制打下基础。<br>　　方法：<br>　　在本研究中，我们将C57BL/6J小鼠分成三组(Normal组、LPS组和TRALI组)，采取腹腔注射脂多糖和Anti-CD36单克隆抗体的方式建立TRALI小鼠模型。在成功建立模型之后，我们对小鼠的肺部组织进行了转录组测序，并利用GO、KEGG、Reactome、PPI互作网络等分析技术，挖掘该疾病的关键基因和核心通路。通过RT-qPCR、Western Blot、血清ELISA检测及荧光染色技术等实验对所得结果进行了进一步验证。<br>　　结果：<br>　　一、CD36抗体介导的TRALI小鼠模型的建立<br>　　CD36抗体输注后，30min内小鼠肛门温度显著降低，小鼠肺组织湿重干重比值显著增加。与Normal组和LPS组相比，这些差异都具有统计学意义。显微镜下可见肺组织结构出现明显病理改变。与Normal组和LPS组相比，TRALI组小鼠肺组织中出现大量炎性细胞和红细胞。小鼠肺组织支气管肺泡灌洗液中总蛋白含量、趋化因子CXCL1、CXCL2和炎症因子TNF-α的表达量均显著增加。以上结果提示，CD36抗体介导的输血相关性急性肺损伤小鼠模型建立成功。<br>　　二、CD36抗体介导的TRALI小鼠肺组织测序及质量评估<br>　　对三组小鼠的肺组织进行转录组测序，并对数据进行质控评估。根据质控结果，clean reads数目可达5～8×109，有效碱基比例高达99％,Q30占比超过92％,GC含量在49.1％～49.7％之间，基因组比对率超过97.7％。以上结果均符合质控标准，提示转录组测序结果可靠可信，为后续分析提供了可靠的依据。<br>　　三、CD36抗体介导的TRALI小鼠肺组织测序结果分析及验证<br>　　1.DEGs的通路富集结果<br>　　为了探究CD36抗体介导的TRALI的关键通路，本研究对LPS组和TRALI组的879个差异基因进行GO、KEGG、Reactome富集分析。结果显示，细胞因子与受体的相互作用通路、IL-17通路、MAPK通路在TRALI中起到了重要作用。<br>　　2.分析关键基因，并对MMP-9的表达情况进行验证<br>　　为了进一步挖掘这一过程中的关键基因并找到具有潜在临床价值的新靶点,本研究利用PPI网络图和Cytoscape3.9.1进一步分析，得到10个潜在的关键基因（TNF、IL-6、IL-10、CXCL1、CXCL2、FOS、CCL2、CCL4、TLR2、MMP-9）,并利用RT-qPCR验证这些基因的表达量变化情况。将关键基因和核心通路进行富集分析，挖掘基因和通路间的相关关系。综合关键基因的富集分数，和核心通路的相关关系，以及关键基因在相关领域的研究成果，最终确定MMP-9为进一步研究对象。<br>　　为了验证MMP-9在输血相关性急性肺损伤中的表达情况，本研究采用Western Blot验证MMP-9在小鼠肺组织中的表达量变化，采用ELISA检测血清中MMP-9的含量变化，并通过荧光染色技术观察和分析肺组织中MMP-9的表达情况。结果显示，分析所得的10个关键基因在TRALI发生后在肺组织中的表达量均上调，与测序结果一致;Western Blot检测到TRALI小鼠肺组织MMP-9蛋白表达量显著性上升;ELISA检测到TRALI小鼠血清中MMP-9的含量显著性上升;荧光结果显示，MMP-9在肺组织的中性粒细胞和单核巨噬细胞上均有大量表达。<br>　　结论：<br>　　本研究成功建立了 CD36抗体介导TRALI的动物模型，发现了 10个在TRALI发生发展起到关键作用的基因（TNF、IL-6、IL-10、CXCL1、CXCL2、FOS、CCL2、CCL4、TLR2、MMP-9）和核心通路（细胞因子与受体的相互作用通路、IL-17通路和MAPK通路），并进行了相关验证。综合研究结果，MMP-9是一个潜在的关键基因，参与的核心通路包括IL-17通路和MAPK通路，具有作为临床关键性检测指标或治疗靶点的潜力，但仍需要进一步研究加以验证。<br>　　创新之处<br>　　我们首次建立了 CD36抗体介导的TRALI小鼠模型。目前尚无TRALI相关的转录组测序分析研究,本研究揭示了参与TRALI过程的关键基因和核心通路,并发现了具有潜在价值的靶点MMP-9,为TRALI的后续机制研究和临床治疗研究提供了新的思路。<br>　　展望：<br>　　结合现有研究及本研究结果，进一步利用小干扰RNA转染技术，局部敲除小鼠肺组织中MMP-9的表达，观察是否有TRALI的发生。采用MMP-9基因敲除鼠进一步对MMP-9在TRALI中的作用展开研究。此外，可进一步补充体内外实验，对MMP-9和单核巨噬细胞和内皮细胞的关系进行探究。