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摘要研究背景:<br>　　脑缺血再灌注损伤(CerebralIschemia/Reperfusioninjury,CIRI)后病理生理过程十分复杂，其中错误折叠蛋白质以及损伤细胞器的积累是导致神经元死亡的重要原因，而自噬溶酶体通路(theautophagy-lysosomalpathway,ALP)是神经元清除长期错误折叠蛋白质、损伤细胞器从而维持细胞稳态的重要途径。有广泛研究证实外泌体可以通过调控自噬改善多种疾病，但目前还未有研究报道骨髓间充质干细胞来源的外泌体(BoneMesenchymalStemCells-Exosome,BMSC-Exos)在CIRI后ALP功能障碍中的调控作用。本课题组前期在体外实验中证实BMSC-Exos可以抑制OGD/R后PC12细胞中mTOR的表达。已知，当抑制mTOR表达时，可以促使TFEB去磷酸化从而进入细胞核，激活ALP通路。本研究拟探明CIRI体内模型—tMCAO大鼠造模后不同时间点ALP的改变、明确BMSC-Exos干预是否可以调控tMCAO大鼠后ALP功能障碍以及其具体作用机制，为BMSC-Exos的临床转化提供理论基础。<br>　　研究目的:<br>　　探究tMCAO大鼠造模后不同时间点ALP状态;验证BMSC-Exos可以改善tMCAO大鼠ALP功能障碍，以及探究其具体作用机制。<br>　　研究方法:<br>　　1.使用超速离心法进行外泌体提取并进行鉴定。<br>　　2.分别通过Westernblot、免疫荧光检测tMCAO大鼠造模后不同时间点ALP改变以及BMSC-Exos干预后的作用效果。<br>　　3.使用mNSS评分、转角试验、转棒实验验证BMSC-Exos对tMCAO大鼠的神经功能缺陷的作用效果。<br>　　4.通过Westernblot、免疫荧光检测BMSC-Exos对于胞质胞核TFEB以及mTOR表达的影响。<br>　　5.通过CCK8验证OGD/R不同时间点细胞存活率，确定合适造模时间且进一步验证BMSC-Exos干预对于OGD/R后PC12细胞存活率的影响，以及使用MHY1485（mTOR激动剂）、Rapamycin（mTOR抑制剂）后对其存活率的影响以及TFEB入核情况;进一步使用免疫荧光染色验证不同组别之间CTSB的免疫荧光强度。<br>　　研究结果:<br>　　1.成功提取BMSCs以及BMSC-Exos,经鉴定均符合要求。<br>　　2.BMSC-Exos可以减少tMCAO大鼠脑梗死面积，改善mNSS短期行为学。<br>　　3.BMSC-Exos可以改善tMCAO大鼠在转角实验以及转棒实验中的行为学表现。<br>　　4.tMCAO大鼠造模后72h出现ALP功能障碍。<br>　　5.BMSC-Exos可以改善tMCAO大鼠造模后72h出现的ALP功能障碍。<br>　　6.BMSC-Exos可以抑制mTOR表达，促进胞核中TFEB表达。<br>　　7.BMSC-Exos可以提高OGD/R后PC12细胞存活率及促进TFEB入核，该效应可被MHY1485逆转，且与Rapamycin的效果相同，初步证实BMSC-Exos主要通过抑制mTOR来改善ALP功能障碍。<br>　　结论:<br>　　BMSC-Exos可能通过抑制mTOR,促进TFEB入核，改善ALP进而减轻脑缺血再灌注损伤。