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刺五加根超声提取工艺优化及质量评价

摘要刺五加作为东北道地药材,活性成分丰富,药理作用广泛,近百年来为维护人类健康做出重要贡献。活性成分是中药发挥药效作用的物质基础,其定性、定量分析及高效提取是中药研究及发展的关键。此外,研究表明,受温度、湿度以及种群结构等诸多因素影响,中药质量必然存在差异。活性成分含量是其最直观反映,受到广泛重视。<br>  本研究先对刺五加根活性成分进行定性及定量分析,为后续研究及资源利用奠定基础。建立UPLC Q Exactive Focus MS/MS定性分析方法采集刺五加根提取液化学成分质谱数据,由Compound Discoverer软件建立天然产物鉴定流程对刺五加根提取液化学成分进行非靶向分析。最终,从刺五加根提取液中共解析得35个化学成分。其中,29个化合物已被报道为刺五加活性成分,而另6个化合物未在其相关研究中被检索,需要后续研究进一步探究说明。此外,对刺五加根重要活性成分(紫丁香苷、刺五加苷E、异嗪皮啶、芝麻素、绿原酸、咖啡酸)进行靶向分析,增加鉴定结果真实性,并建立超高效液相色谱-质谱(UPLC-MS/MS)定量方法,可10min内完成上述目标化合物定性及定量分析。另外,为丰富刺五加根质量评价体系以更客观反映刺五加根质量,还建立紫外-可见分光光度法用以测定刺五加根临床疗效物质基础(总苷、总酚、总黄酮、总皂苷)含量。<br>  其次,优化刺五加根多组分超声提取工艺,为其质量评价以及药效基础研究奠定基础。将层次分析法(AHP)与熵权法(EWM)结合建立一种既能通过主观经验对指标重要性进行分配,又能客观反应指标信息的多指标综合评价方法(AHP-EWM法);而后基于UPLC-MS/MS定量方法及AHP-EWM法,由单因素结合基于BBD的响应面法(RSM)优化刺五加根多组分超声提取工艺;确定刺五加根多组分超声提取最优工艺为超声功率780W、超声时间17.5min、料液比1/40g/mL、乙醇体积分数57%、原料粒径80目;最终验证结果显示,刺五加根中紫丁香苷、刺五加苷E、异嗪皮啶、芝麻素、绿原酸、咖啡酸含量分别为517.96±6.09μg/g、861.25±5.30μg/g、66.66±1.22μg/g、99.36±0.69μg/g、2235.84±12.17μg/g、45.75±0.77μg/g,且基于AHP-EWM法所得综合得分为95.45±0.39,与预测理论值接近。<br>  最后,基于指标成分含量评价不同产地刺五加根质量差异,旨在为刺五加资源利用奠定基础。从15个产地收集刺五加根,每个产地各3个批次,共计45个样本;由UPLC-MS/MS方法测定不同产地刺五加根紫丁香苷、刺五加苷E、异嗪皮啶、芝麻素、绿原酸、咖啡酸含量,再由紫外-可见分光光度法测定其总苷、总酚、总黄酮、总皂苷含量;结合化学计量学方法——主成分分析(PCA)、聚类分析(CA)、正交偏最小二乘法判别分析(OPLS-DA)对不同产地刺五加根质量差异进行评价。PCA及CA表明同一产地不同批次刺五加根质量差异小,但不同产地刺五加根质量差异显著,与地域划分有一定关联。OPLS-DA判别表明相同省份刺五加根样本能较好聚类,并区分于其他省份样本;不同省份刺五加根质量差异标志成分不同且贡献不一。可能是由于不同生境下指标成分代谢途径不同,从而影响其含量,最终导致质量差异。<br>  本研究先对刺五加根活性成分进行定性及定量分析,为后续研究奠定基础;而后基于多指标综合评价优化刺五加根多组分超声提取工艺,为其质量评价以及药效基础研究提供理论及实践指导;并基于指标成分含量评价不同产地刺五加根质量差异,对其用药安全、质量控制及资源利用有重要意义,同时也为建立中药质量评价体系提供思路及实践指导。

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