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摘要目的:结直肠癌是最常见的消化系统肿瘤之一，据世界卫生组织国际癌症机构(IARC)发布的全球数据显示:在世界范围内，结直肠癌成为第三大癌症。临床以奥沙利铂(Oxaliplatin,OX)、5-氟尿嘧啶(5-Fluorouracil,5-FU)和亚叶酸钙(Calcium folinate,CF)联合治疗作为标准化疗策略之一，以奥沙利铂为基础的化疗方法在结直肠癌治疗中起着重要作用。然而，多药耐药性(Multiple drug resistance,MDR)的发展是结直肠癌患者化疗疗效降低、预期寿命降低的主要原因。结直肠癌术后化疗过程中多药耐药性的发展，大大降低了临床的治疗效果。具有化学性质的纳米结构药物传递系统被认为是很有前途的治疗结直肠癌细胞MDR的候选方法。掺硒磷酸锰(Se-MnP)纳米颗粒可以通过持续释放硒(Selenium,Se),来逆转结直肠癌耐药性，具有提高结直肠癌化疗效果的潜力。<br>　　方法:(1)OX@Se-MnP纳米材料的制备及其理化性质。首先，利用果糖二磷酸二钠(C6H12Na2O12P2,Na2FDP)的有机磷酸化分子代替传统的磷酸盐，通过酶促反应合成了 Se-MnP纳米颗粒。Se-MnP和OX的悬浮液在超声波浴中处理1 h,然后在密封容器中以37℃摇匀24h,离心干燥，得到OX@Se-MnP纳米颗粒。通过扫描电子显微镜、X射线衍射、Zeta电位分析、透射电子显微镜、粒径分析、X射线光电子能谱、元素扫描和傅里叶变换红外光谱对OX@Se-MnP纳米材料的结构、尺寸、形貌及化学性质进行表征。通过电感耦合等离子体质谱仪检测Se和Mn2+在OX@Se-MnP中的装载与释放。<br>　　(2)OX@Se-MnP纳米材料的细胞毒性研究。通过CCK8法和活死细胞染色，探究OX@Se-MnP纳米材料的细胞毒性和抗肿瘤效果。通过免疫荧光染色研究人结直肠癌耐药细胞(HCT116/DR)对OX@Se-MnP纳米材料的吞噬。<br>　　(3)OX@Se-MnP纳米材料逆转耐药性的机制研究。通过流式细胞检测技术(Flow cytometry,FCM)探究OX@Se-MnP纳米材料对促进人结直肠癌耐药细胞(HCT116/DR)的凋亡作用。通过蛋白免疫印迹(Western Blot,WB)研究OX@Se-MnP纳米材料随是否降低耐药蛋白的表达。通过荧光显微镜观察OX@Se-MnP纳米材料诱导ROS生成和线粒体膜损伤的作用。<br>　　(4)OX@Se-MnP纳米材料对小鼠结直肠癌耐药模型的作用研究。首先构建裸鼠结直肠癌耐药皮下瘤模型,每3天在肿瘤内注射OX@Se-MnP纳米材料治疗。记录肿瘤大小，评估肿瘤生长抑制作用。通过主要器官的HE染色评估OX@Se-MnP纳米材料是否对主要器官存在潜在损伤。<br>　　(5)通过 HE染色和免疫组化染色(Immuno histo chemistry,IHC)探究OX@Se-MnP纳米材料是否对结直肠癌耐药模型存在抑制作用和下调耐药蛋白的表达水平。<br>　　结果:(1)初产物Se-MnP纳米材料是由有机-无机杂化组成，并由较小规模的纳米团簇组装而成，并在水溶液中有较好的分散性。终产物OX@Se-MnP纳米材料的Zeta电位值为-11.8 mV,粒径约135 nm;通过不同表征多维度论证了OX@Se-MnP中OX的成功装载。<br>　　(2)OX@Se-MnP纳米材料表现出显著的肿瘤杀伤效果，且杀伤效果与OX@Se-MnP浓度成正比。<br>　　(3)体外研究表明，Se-MnP纳米材料是奥沙利铂(OX)的有效药物载体,可逆转结直肠癌细胞的多药耐药性，诱导caspase介导的细胞凋亡。Se-MnP纳米材料通过释放的硒(Se)激活介导的STAT3/JNK通路;释放的锰离子(Mn2+)的引起的类Fenton样反应，诱导细胞内过量ROS的产生。<br>　　(4)OX@Se-MnP纳米材料通过下调MDR相关的ABC转运蛋白的表达,来逆转结直肠癌的MDR。<br>　　(5)最后体内研究表明，OX@Se-MnP纳米材料可显著抑制裸鼠中结直肠癌耐药细胞(HCT116/DR)的增殖。OX@Se-MnP纳米材料在体内未观察到明显的肝肾毒性及对主要器官的损伤，表现出较好的生物安全性和临床应用潜能。<br>　　结论:本研究构建的OX@Se-MnP纳米材料具有制备简单、仿生化学性质、生物相容性、生物活性和逆转耐药能力等优势，是基于纳米材料的结构制备可以逆转肿瘤多药耐药的新型生物材料，有望为肿瘤多药耐药的治疗提供研究思路和治疗手段。