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摘要目的:<br>　　类风湿关节炎(Rheumatoid arthritis,RA)是一种以对称性小关节炎为主要临床表现的自身免疫性疾病。由于尚无治愈方法，所以类风湿关节炎的早期诊断、早期干预对患者的预后有着重要的影响。然而，普通临床影像学诊断只能观察到解剖结构的改变，对更加早期的分子、细胞水平改变的成像能力缺失。因此，本研究通过纳米共沉淀法合成叶酸修饰的Cptnc-4F纳米探针(FA-CF-NPs),用于靶向类风湿关节炎关节处的巨噬细胞。本研究旨在用FA-CF-NPs实现类风湿关节炎小鼠模型的近红外二区荧光/光声双模态诊断成像，为临床类风湿关节炎影像学诊断提供参考。<br>　　方法:<br>　　1.FA-CF-NPs的合成与表征:通过纳米共沉淀法合成FA-CF-NPs。透射电镜和动态光散射仪被用于观察探针的形态和尺寸。紫外分光光度计和荧光光谱仪被用于测量探针的紫外吸收光谱和荧光发射光谱。近红外二区荧光成像系统和光声成像系统被用于检测探针的成像性能。此外，探针的包封率、稳定性分别通过紫外分光光度计和动态光散射仪测得。<br>　　2.体外靶向实验:探针的细胞毒性通过CCK-8法使用酶标仪测得。使用小鼠单核巨噬细胞白血病细胞(RAW264.7 cell line)和小鼠骨髓来源巨噬细胞(Bone-marrow-derived macrophage)作为体外摄取模型。通过流式细胞术和激光共聚焦成像技术证明探针的体外靶向能力。<br>　　3.活体靶向成像实验:使用胶原诱导关节炎小鼠(Collagen-induced arthritis mouse)作为活体靶向模型，进行类风湿关节炎近红外二区荧光/光声双模态成像和早期类风湿关节炎近红外二区荧光成像。<br>　　4.FA-CF-NPs的生物安全性:使用健康BALB/c小鼠检测探针生物相容性。经尾静脉注射两倍成像浓度探针后的第1、4、7天，通过分析小鼠血常规、血生化和主要器官HE染色切片结果，评价探针生物相容性。<br>　　结果:<br>　　1.FA-CF-NPs的合成与表征:FA-CF-NPs为直径9.5±1.4 nm的球形颗粒，具有较强的近红外二区荧光信号和光声信号。使用紫外分光光度计测得探针包封率为83.0±0.1％。探针在4℃环境中可以稳定储存4周。<br>　　2.体外靶向实验:高浓度的探针没有观察到明显的细胞毒性。体外摄取实验显示FA-CF-NPs对高表达叶酸受体的巨噬细胞具有高亲和力。即激活细胞后，靶向组的探针荧光强度是非靶向组的～1.9倍(小鼠单核巨噬细胞白血病细胞)和～1.8倍(小鼠骨髓来源巨噬细胞)，靶向组的探针荧光强度是封闭组的～2.9倍(小鼠单核巨噬细胞白血病细胞)和～2.1倍(小鼠骨髓来源巨噬细胞);未激活巨噬细胞对靶向与非靶向探针的摄取没有明显区别。<br>　　3.活体靶向成像实验:在类风湿关节炎小鼠模型上，采用FA-CF-NPs实现近红外二区荧光成像，准确定位关节内的巨噬细胞，获得15.5的高信号背景比(SBR)。同时进行光声成像，观察整个关节纵断面巨噬细胞的分布情况。此外，在没有出现血管翳、软骨损失等病理改变的早期小鼠模型中实现了发病关节的定位成像。<br>　　4.FA-CF-NPs的生物安全性:两倍成像浓度的探针没有使小鼠出现明显的血项异常及脏器损伤，提示探针具有良好的生物相容性。<br>　　结论:<br>　　本研究开发了以巨噬细胞为靶点的叶酸修饰的Cptnc-4F纳米探针(FA-CF-NPs)用于类风湿关节炎的近红外二区荧光/光声双模态成像。并且成功在没有出现滑膜炎和软骨丢失等病理改变的类风湿关节炎小鼠模型的关节炎关节中观察到巨噬细胞浸润。这为选择巨噬细胞作为类风湿关节炎早期诊断的特异性靶点提供了一种创新途径。