摘要目的:<br> 观察复方生脉成骨胶囊在体外对肌腱干细胞的影响,探究复方生脉成骨胶囊对髌腱缺损大鼠损伤修复的效果和其可能的作用机制,为复方生脉成骨胶囊等中药复方防治肌腱病的分子作用机制提供新的理论依据、实验依据以及治疗思路。<br> 方法:<br> 1.第一部分用酶消化法从大鼠髌肌腱中分离获得TDSCs(Tendon-derived stem cells),体外原代培养。并在此基础上用细胞免疫荧光技术对TDSCs的相关标志物SSEA-4和OCT-4进行鉴定,留取第1代肌腱干细胞通过CCK8实验观察复方生脉成骨胶囊对于大鼠肌腱干细胞TDSCs的细胞增殖活性影响;进行qRT-PCR检测在有无复方生脉成骨胶囊干预大鼠肌腱干细胞TDSCs的情况下肌腱相关标志物marker的表达;<br> 2.第二部分以SPF级雌性SD大鼠为实验对象,随机分为空白对照组、模型对照组、药物低浓度组、药物高浓度组。通过手术构建大鼠髌腱缺损模型,造模后给予复方生脉成骨胶囊对其进行干预治疗;通过苏木素-伊红染色评估各组大鼠髌腱缺损的恢复情况;通过Masson染色对比各组大鼠髌腱损伤及恢复,并通过免疫组织化学(Immunohistochemistry,IHC)染色及免疫荧光技术(Immunofluorescence,IF)对比肌腱分化相关蛋白在各组大鼠的髌腱组织中的表达情况;通过RNA-seq探究有无复方生脉成骨胶囊干预大鼠髌腱损伤后的转录组基因表达差异,并通过生物信息学分析聚焦相关通路。<br> 结果:<br> 1.建立了稳定可靠的大鼠肌腱干细胞的体外培养方法,所获得的TDSCs细胞具有自我更新和多谱系分化潜能,细胞增殖能力活跃,生长状态良好;<br> 2.用SPF级雌性SD大鼠建立髌腱缺损模型成功,不同浓度的的复方生脉成骨胶囊对大鼠髌腱损伤修复的效果中,给药组的肌腱组织相比于模型组的肌腱组织中肌腱相关标志物marker如Scx、GDF6等的表达都有所升高,并且药物高浓度组的表达更显著,提示可能存在药物浓度依赖性;<br> 3.通过对比有无复方生脉成骨胶囊干预大鼠髌腱损伤的转录组基因表达情况,发现复方生脉成骨胶囊干预大鼠髌腱损伤后有53个基因表达上调,45个基因表达下调,并获取可能相关的通路。<br> 结论:<br> 复方生脉成骨胶囊能有效促进大鼠髌腱损伤模型中髌腱损伤的愈合和修复,并且可能与复方生脉成骨胶囊促进肌腱生成相关基因的表达等作用相关,这些潜在的效应机制可能促进肌腱病的修复进程。
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