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摘要第一部分GSDME通过JAK/STAT3通路调控非小细胞肺癌恶性生物学行为<br>　　研究背景:Gasdermins(GSDMs)家族因介导促炎性细胞程序性死亡—细胞焦亡而备受关注。目前关于GSDMs家族的研究大多聚焦于细胞焦亡在抗肿瘤免疫过程中的作用，而关于GSDMs家族基因本身对肿瘤细胞特性的影响研究较少，GSDME在非小细胞肺癌中的作用及机制并不明确。<br>　　研究方法:本研究收集非小细胞肺癌患者的肿瘤组织标本及临床信息，通过免疫组织化学染色的方法对肿瘤组织中GSDME的表达水平进行评估，并分析GSDME表达水平与化疗疗效及预后的相关性。在细胞模型中，探索GSDME对肿瘤恶性行为及化疗敏感性的影响，并通过二代测序技术探索其潜在的机制，同时利用通路抑制剂在细胞层面和裸鼠皮下肿瘤模型层面进行验证。最后，在免疫健全小鼠皮下肿瘤模型中,探索GSDME对肿瘤免疫微环境以及化疗和抗PD-1单克隆抗体治疗敏感性的影响。<br>　　研究结果:在43例非小细胞肺癌患者中，9例患者GSDME处于高表达水平，34例患者GSDME处于低表达状态。相关性分析显示，与GSDME低表达的患者相比，GSDME高表达的患者对化疗的疗效反应更好(p值=0.023);Kaplan-Meier生存分析显示，GSDME高表达的患者，术后无病生存期更长(中位生存时间33.3个月vs.21.5个月，p值=0.035)。在细胞模型中，过表达GSDME能够显著抑制非小细胞肺癌的增殖、迁移、侵袭和促血管形成等恶性生物学行为，并且能提高肿瘤细胞对顺铂的敏感性;而敲低GSDME表达则可显著促进非小细胞肺癌的恶性生物学行为，并降低其对顺铂的敏感性。在裸鼠皮下肿瘤模型中，与对照组(shNC)相比，稳定敲低GSDME组(shGSDME)的肿瘤生长更快，对化疗的敏感性更差，尾静脉注射两组细胞后也发现，shGSDME组的肿瘤细胞更容易发生肺转移。二代测序结果显示，4株细胞系的GSDME干预组和对照组的差异基因均可富集到JAK-STAT通路。蛋白质免疫印迹实验发现，过表达GSDME可抑制非小细胞肺癌JAK-STAT3通路的激活，敲低GSDME则可激活JAK-STAT3通路。而p-STAT3抑制剂SH-4-54可显著逆转GSDME敲低对肿瘤细胞及裸鼠皮下肿瘤恶性行为的促进作用。在免疫健全小鼠皮下肿瘤模型中，与shNC组相比，shGSDME组肿瘤的生长速度更快，对顺铂、抗PD-1单克隆抗体的治疗敏感性也更差。二代测序结果显示，shNC组和shGSDME组的差异基因可显著富集到JAK-STAT3通路、肿瘤PD-L1表达和PD-1免疫检查点通路。通过ImmuCellAI-mouse平台对肿瘤组织中的免疫细胞组分进行估算，结果发现，与shNC组的肿瘤相比，shGSDME组的肿瘤组织中浸润的CD8+T细胞减少(p值=0.01),而免疫负性调控相关的肥大细胞、Treg细胞和中性粒细胞在shGSDME组富集丰度高于shNC组，但未达到统计学意义(p值分别为0.116,0.375,0.073)。<br>　　研究结论:在非小细胞肺癌中，GSDME可能通过JAK-STAT3通路抑制肿瘤细胞的增殖、迁移、侵袭和促血管形成等恶性生物学行为，提高肿瘤对化疗的敏感性。在肿瘤微环境方面，GSDME可能通过JAK-STAT3通路介导活跃的免疫微环境，从而抑制肿瘤进展，提高肿瘤对化疗及免疫治疗的敏感性。GSDME有望成为非小细胞肺癌患者预后及疗效预测的生物标志物。<br>　　第二部分:MGA突变作为肺腺癌免疫检查点抑制剂治疗生物标志物的研究<br>　　研究背景:以抗PD-1/PD-L1单克隆抗体为代表的免疫检查点抑制剂治疗在肿瘤治疗中已经取得革命性突破，显著延长了肿瘤患者的生存期，但获益人群仍十分有限。通过探寻预测性生物标志物来更精准地识别和筛选出获益人群是目前研究的热点，也是提高肿瘤患者生存质量、延长肿瘤患者生存期的关键。<br>　　研究方法:基于MSKCC队列，我们在接受免疫检查点抑制剂(immunecheckpointinhibitors,ICIs)治疗的多种肿瘤患者中分析了Max关联蛋白(Max''sgiantassociatedprotein,MGA)突变对免疫治疗疗效和预后的预测作用，并在验证队列中进行了验证。另外，我们针对TCGA数据库中的肺腺癌转录组测序数据进行了基因集富集分析(genesetenrichmentanalysis,GSEA)和免疫细胞浸润分析，旨在探索MGA突变作为ICIs疗效和预后标志物的潜在机制。<br>　　研究结果:在MSKCC发现队列中，MGA突变可预测肺腺癌患者接受ICIs治疗的疗效，也可作为接受ICIs治疗的肺腺癌患者的预后标志物，但在其他肿瘤中未观察到这一现象。另外，我们也发现MGA突变与TMB评分呈正相关。验证队列的结果与发现队列中肺腺癌的结果一致。并且，在低TMB或高PD-L1表达亚组中，MGA突变的患者有更长的生存期。多因素分析结果表明，MGA突变是接受ICIs治疗的肺腺癌患者的独立预后标志物。在机制上，我们发现PTPRD等与MGA共突变的基因并不影响MGA突变对免疫检查点抑制剂预后的预测作用。此外，GSEA分析结果显示，原发性免疫缺陷通路相关基因在MGA野生型组中显著富集。免疫细胞浸润分析结果表明，MGA突变型的肺腺癌患者中活化的NK细胞含量更多。<br>　　研究结论:肿瘤组织MGA突变是肺腺癌免疫检查点抑制剂治疗的疗效和预后的预测标志物，并且该预测作用可独立于PD-L1表达和TMB。这些结果可能为筛选ICIs治疗的潜在获益人群提供了新的参考。