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摘要乙肝病毒(HepatitisBVirus,HBV)感染仍是世界范围内的人类健康隐患之一。目前全球慢性乙肝病毒感染者约有2.57亿人，但现有的治疗药物不能治愈慢性乙肝病毒感染，其原因在于HBV在宿主细胞内形成的共价闭合环状DNA(cccDNA)不能被完全清除。cccDNA作为病毒全部RNA的转录模板，维持病毒的持续复制。因此，抑制cccDNA的转录活性是一种潜在的治疗策略。<br>　　染色质结构维持蛋白(SMC)5/6复合体是目前已知的HBV转录抑制因子。HBV编码的X蛋白可以通过DDB1介导的泛素连接通路降解SMC5/6,从而解除宿主的抑制，缺失X蛋白的HBV突变病毒(HBV-△X)处于转录沉默状态。SMC5/6分布在细胞核且与细胞核内的PML小体共定位，当通过敲降PML小体的结构蛋白PML和SP100从而破坏PML小体之后，HBV-△X的转录恢复活跃，而此时抑制因子SMC5/6依然存在，提示PML小体组分蛋白可能参与了HBV的转录抑制。因此，我们设计了针对PML小体相关蛋白的siRNA,通过在HepG2-NTCP感染系统上进行siRNA筛选，鉴定到了一个新的HBV转录抑制因子SLF2(SMC5-SMC6complexlocalizationfactor2)。蛋白和染色质免疫共沉淀结果表明,SLF2通过590-710位氨基酸区段与SMC6结合，该蛋白在cccDNA上富集并介导SMC5/6对cccDNA的靶定。结合影像学实验，我们发现SLF2通过自身的无序折叠区段(1-710位氨基酸)定位在PML小体，且SLF2是SMC5/6在PML小体定位的上游因子。通过对不同截短型SLF2功能的研究，以及结合DNA原位分子杂交技术，我们发现SLF2通过与SMC5/6共同靶定cccDNA,将cccDNA定位在PML小体上，从而使得HBV转录沉默。随后，我们引入了一个新颖的DNA定向定位系统(CRISPR-GO)来替代SLF2的功能，该系统通过dCas9-gRNA靶定特定序列DNA,并通过小分子诱导的蛋白结合将目标DNA定位至细胞核内的特定核小体。对于转录活跃的野生型HBV(HBV-WT),当使用多条gRNA靶定cccDNA,并诱导cccDNA定位至PML小体后，病毒的转录活性降低，证实了cccDNA定位于PML小体导致病毒转录抑制。<br>　　综上所述，本课题通过siRNA筛选鉴定到SMC5/6抑制HBV转录的上游因子SLF2,SLF2与SMC5/6结合，共同靶定HBVcccDNA,并通过其无序折叠区段将cccDNA定位在PML小体上，从而使病毒转录处于沉默状态。本研究揭示了一种新的宿主抗HBV感染的机制，为有效抗HBV感染提供了新的思路，也为深入研究可能普遍存在的宿主抗病毒机制提供了线索。