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摘要第一部分PCBP1与局部进展期直肠癌放疗抵抗的相关性研究<br>　　研究背景:结直肠癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一，也是癌症死亡的主要原因。在我国，直肠癌占有很高的比例，而局部进展期直肠癌(locallyadvancedrectalcancer,LARC)的标准治疗方案是新辅助放化疗(Neoadjuvantchemoradiotherapy,nCRT)后进行全直肠系膜切除。患者对nCRT的个体反应具有明显差异，nCRT治疗后仅15％-20％的LARC患者可实现病理完全缓解。这种联合方案显著提高了患者的总生存率，但是广泛的放疗毒副作用和有限的有效率也给治疗带来新的挑战。探究肠癌放化疗抵抗的机制，挖掘临床转化潜能的靶点，是目前直肠癌治疗的重要研究方向。多聚胞嘧啶结合蛋白1(poly-cytosinebindingproteins,PCBP1)位于二号染色体，属于异核糖核苷酸家族。最新研究表明，PCBP1可以作为关键的调控因子参与肿瘤进展的调控，并与肿瘤增殖、上皮间质转化、肿瘤免疫微环境重塑密切相关。因此，我们推测PCBP1的表达可能与进展期直肠癌放化疗抵抗密切相关。然而，目前关于PCBP1在直肠癌进展和放化疗抵抗中的作用尚不明确。<br>　　研究方法:随访2015年1月至2018年7月期间245名接受nCRT治疗后行TME的直肠癌患者，将TRG3-4级的患者定义为放疗敏感组，将TRG0-2级的患者定义为放疗抵抗组。结合TCGA数据库，全面揭示了PCBP1在直肠癌中的表达情况和临床意义;并通过免疫组化，探究PCBP1与进展期直肠癌放疗抵抗的相关性。为了进一步探究PCBP1在肠癌放疗抵抗中发挥的作用，构建了PCBP1表达沉默细胞系，进行转录组测序分析及体内实验。<br>　　研究结果:TCGA转录组数据结果提示放疗敏感组中CD8阳性T细胞、CD4阳性T细胞显著高于放疗抵抗组，而CD4Th2T细胞显著低于放疗抵抗组，其中CD8阳性T细胞更具有统计学差异。我们通过收集患者放疗前肠镜样本，将样本组织进行CD3以及CD8免疫组化，结果表明，CD3以及CD8阳性细胞数在放疗敏感的组中显著高于放疗抵抗组，与公共数据库的分析结果一致。同时我们也探究了PCBP1在两组患者肿瘤组织中的表达，结果显示，PCBP1在放疗敏感的组中显著高于放疗抵抗的组中，同时PCBP1在肠癌中显示为正常组织表达高于肿瘤组织。并且在PCBP1高表达组中CD8阳性细胞数显著高于PCBP1低表达组，提示PCBP1的表达和CD8阳性细胞数成正相关。随后我们在肠癌细胞中下调PCBP1表达，并进行了体内实验，实验结果提示PCBP1表达下降以后，肠癌细胞对放疗的敏感性显著下降。<br>　　结论:PCBP1的表达下降与直肠癌预后不良以及进展期直肠癌对nCRT不敏感相关;在接受放疗的进展期直肠癌中，PCBP1表达与CD8T细胞密切相关。<br>　　第二部分放疗引发二次原发肿瘤的发病特征<br>　　背景:肿瘤患者接受放射治疗(RT)后发生第二原发性恶性肿瘤(SPM)的风险逐年上升。目前，很少有基于人群的大型研究全面评估肿瘤幸存者中由放疗引发SPM的相关风险，大多数研究仅评估了单一类型原发肿瘤或有限数量癌症的SPM发生率或风险。放射治疗是盆腔癌患者常见的治疗选择，可能诱发第二次原发性放射性直肠癌(SC)的发生。并且，与原发性直肠癌相比，放射性直肠癌的分子特征和免疫微环境状况尚未见报道。<br>　　方法:这是一项涵盖多种肿瘤的队列研究，使用了SEER数据库中1973年1月至2015年12月期间的数据。通过多因素COX和Fine&Gray风险回归分析来评估接受放疗(RT)的患者与接受无放疗(NRT)的患者相比，SPM的风险比(HR)和95％的置信区间(CI)。泊松回归用于评估放疗相关风险(RR)和标准化发病率(SIR)。我们收集了两例原发肿瘤为宫颈癌、二次原发癌为直肠腺癌(SC)的患者(患者A:2017-9-21宫颈癌;2020-12-2直肠癌;患者B:2009年宫颈癌;2020-12-3直肠癌)，两粒患者均在宫颈癌术后接受放疗;以及收集两例初次原发癌为直肠癌(PC)患者，对该两组进行了16,334个单细胞RNA(scRNA)转录组。我们首先估计了不同的上皮肿瘤细胞和SC的特异性免疫微环境，并通过免疫荧光对大量临床样本进行验证。<br>　　结果:根据SPM与RT后风险变化的相关性，基于无监督层次聚类将SPM分为风险上调组(RI-SPM)、风险下调组(RD-SPM)和风险无相关组(RU-SPM)。其中,RI-SPM组包括眼眶、口底、舌、口咽、下咽、鼻咽、喉、食管、肺及支气管、乳腺、肝、胰、胃、小肠、结肠、直肠、卵巢、子宫体、输尿管、阴道、膀胱、阴茎、睾丸、肾及肾盂等24种类型的恶性肿瘤。RI-SPM组中，RT的二次癌累积发生率明显高于NRT(19.8％vs15.3％,P＜0.001)。RI-SPM的发病趋势随着初次原发癌诊断年龄的增加而下降(20-49岁:RR,1.52;50-69岁:RR,1.31;70岁:RR,1.21),并且随着初次原发癌诊断后潜伏期的增加而增加(60-119个月:RR,1.28;120-239个月:RR,1.24;240-360个月:RR,1.46)。单细胞测序结果表明，相较于PC组织,SC中TregCD4+T细胞增多，中性粒细胞积聚;而CXCL13+CD8+T细胞在PC中的含量显著高于SC。<br>　　结论:RI-SPM发病时间累积危险性大，值得重视;长期监测对于接受RT治疗的肿瘤患者是必要的;PC和SC之间独特的肿瘤微环境，进一步提供了对SC细胞结构的理解，并有助于开发新的SC诊断和治疗方法。