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摘要第一部分基于DNAJB6/KIAA1522/p-mTOR三蛋白的结直肠癌预后预测模型的构建<br>　　背景:在全球范围内，结直肠癌(Colorectalcancer,CRC)的发病率及死亡率均位于恶性肿瘤前列，准确的预后判断是提高患者生存率的关键。目前，TNM分期被广泛用于CRC的肿瘤分期及预后预测。然而，CRC在分子水平上存在高度异质性,临床病理特征相同的患者预后可能存在显著差异，因此生物标志物有望在提高CRC患者预后判断准确性方面发挥重要作用。本研究旨在评估DNAJB6、KIAA1522和p-mTOR蛋白的表达水平在CRC预后中的价值，并建立有效的CRC患者预后模型。<br>　　方法:首先采用免疫组化方法检测329例CRC标本中DNAJB6、KIAA1522和p-mTOR(Ser2448)蛋白的表达，分析其表达量与临床病理参数的关系。接下来将患者随机分为训练队列(n=230)及验证队列(n=99),采用Kaplan-Meier法、单因素和多因素Cox比例风险回归模型评估训练队列中的三种蛋白的预后价值，并构建了整合三种蛋白和TNM分期的预后列线图模型。随后，我们使用受试者工作特征(Receiveroperatingcharacteristic,ROC)曲线、一致性指数(Theconcordanceindex,C-index)、校准曲线和决策曲线分析(Decisioncurveanalysis,DCA)评估列线图在训练和验证队列中的预测效能。<br>　　结果:DNAJB6、KIAA1522和p-mTOR三个蛋白在CRC组织中的表达显著上调(P＜0.01),其表达水平是总体生存期(Overallsurvival,OS)和无病生存期(Disease-freesurvival,DFS)的独立预后因素(P均＜0.05)。ROC曲线下面积和一致性指数约为0.7。校准曲线结果表明模型预测值与实际观测值的一致性较好。DCA曲线表明列线图模型的临床效益高于TNM分期。总体而言，该预测模型具有满意的一致性、敏感性与特异性及临床实用性。<br>　　结论:DNAJB6、KIAA1522和p-mTOR高表达是CRC预后不良的独立影响因子。整合DNAJB6、KIAA1522和p-mTOR及TNM分期的列线图可以准确提供CRC患者的预后信息，有望成为CRC预后的新型监测工具。<br>　　第二部分MAP4高表达对结直肠癌细胞恶性表型的影响及相关机制研究<br>　　背景:结直肠癌（colorectalcancer,CRC）是世界范围内流行的消化系统恶性肿瘤,发病率及死亡率均居前列。肿瘤细胞向周围组织侵袭转移是晚期患者预后不良的重要原因，发现调控结直肠癌侵袭转移的关键基因并对其进行生物学功能的分析，已成为目前CRC领域的研究热点。<br>　　目的:探讨微管相关蛋白4（MAP4）对CRC细胞恶性表型的影响及相关分子机制。方法:利用免疫组织化学方法检测CRC组织中MAP4蛋白表达量的变化，采用卡方检验及Fisher精确检验探索MAP4蛋白表达与CRC患者临床病理参数的相关性。采用Kaplan-Meier法及Cox风险比例回归模型探索MAP4表达水平与CRC患者预后的相关性。在结肠癌细胞系DLD1和HCT116中转染小干扰RNA（siRNA）和短发夹RNA（shRNA）敲降MAP4表达;在稳定敲降MAP4的HCT116及DLD1中瞬时转染MAP4同义突变的过表达质粒载体（标记为MAP4-R）进行回复实验。利用CCK8细胞增殖活力实验、细胞集落形成实验、伤口愈合实验、Transwell实验检测MAP4对DLD1和HCT116细胞恶性表型的影响;利用Westernblot检测MAP4及相关下游分子的蛋白表达改变。<br>　　结果:使用含有496例CRC患者组织的微阵列进行免疫组织化学检测，结果显示MAP4在CRC组织中显著上调（P＜0.001）。结合相关临床病理资料进行统计分析发现，MAP4表达水平与淋巴结转移（P=0.009）、局部浸润深度（P＜0.001）、组织病理学分级（P＜0.001）以及病理TNM分期（P=0.002）显著正相关;使用Cox比例风险模型进行多因素回归分析，结果提示MAP4是CRC患者的独立预后因素（总生存期，P=0.015;无病生存期，P=0.020）。进而，我们选取MAP4高表达的CRC细胞株DLD1和HCT116探究MAP4异常表达对CRC细胞恶性表型的影响。体外功能研究结果显示，敲降MAP4表达后CRC细胞的增殖能力无明显改变，但伤口愈合能力和侵袭迁移能力显著降低。回复实验提示在稳定敲降MAP4的细胞中外源过表达MAP4后，细胞的侵袭迁移能力得到恢复。分子水平检测发现干扰MAP4表达可导致ERK和S6的磷酸化水平明显下调。<br>　　结论:MAP4在CRC中异常高表达并且是患者OS及DFS的独立预测因素，同时其高表达可能通过激活ERK及S6相关信号通路增强CRC细胞的侵袭迁移能力。