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摘要目的:本课题计划构建一种新型纳米药物，用于提升抗肿瘤免疫效应。免疫检查点抑制剂(Immunecheckpointblockade,ICB)是近些年肿瘤治疗中的一个重大突破，对多种恶性肿瘤都产生了显著的临床效果，因此，探索新的技术策略以进一步提高ICB的疗效，具有较为重大的潜在医学价值。除抗体外，核酸适配体(Aptamer,Apt)也能够特异性地结合并阻断免疫检查点，提升抗肿瘤免疫作用。目前已有研究报道了针对CTLA-4的DNAaptamer,在细胞和动物水平上均显示出一定的抗肿瘤疗效。肿瘤免疫微环境(Tumorimmunemicroenvironment,TIME)是影响抗肿瘤免疫效果的重要因素。将ICB疗法与能够调节TIME的药物联用，有希望进一步改善ICB的疗效。非索非那定(Fexofenadine,FEXO)是一种组胺受体1(HistaminereceptorH1,H1R)的阻断剂，能够通过调节TIME以增强抗肿瘤免疫反应。基于上述背景，本课题计划构建一种表面连有CTLA-4aptamer且内部包载FEXO的白蛋白纳米颗粒(Apt-NP-FEXO),并评估该纳米药物在体外及体内的抗肿瘤疗效。<br>　　方法:将巯基修饰的CTLA-4aptamer与白蛋白通过sulfo-SMCC相连，形成Apt-BSA,利用琼脂糖凝胶电泳、SDS-PAGE和zeta电位测定的方法，评估Apt-BSA是否形成;通过对先前报道的方法加以改进，采用自组装的方式，分别制备白蛋白纳米颗粒(NP)、CTLA-4aptamer修饰的白蛋白纳米颗粒(Apt-NP)、包载FEXO的白蛋白纳米颗粒(NP-FEXO)、和表面连有CTLA-4aptamer且内部包载FEXO的白蛋白纳米颗粒(Apt-NP-FEXO),利用动态光散射(Dynamiclightscattering,DLS)测定上述纳米颗粒的粒径及zeta电位，利用透射电子显微镜(Transmissionelectronmicroscope,TEM)观察纳米颗粒的形态;通过高效液相色谱(Highperformanceliquidchromatography,HPLC)评估NP-FEXO、Apt-NP-FEXO的载药率、包裹率及FEXO的释放情况;通过流式细胞术、荧光显微镜和共聚焦显微镜评估CTLA-4修饰的纳米颗粒能否结合CTLA-4阳性的细胞;通过CFSE标记的混合淋巴细胞反应(CFSE-labelledmixedlymphocytereaction,CFSE-MLR),评估CTLA-4aptamer修饰的纳米颗粒对淋巴细胞增殖的影响;通过MTS实验，在体外评估游离aptamer及各纳米颗粒是否影响淋巴细胞对肿瘤细胞的杀伤;通过小鼠肿瘤模型，评估各纳米颗粒在体内的抗肿瘤疗效。<br>　　结果:巯基修饰的CTLA-4aptamer能够与白蛋白连接形成Apt-BSA,并成功制备出NP、Apt-NP、NP-FEXO和Apt-NP-FEXO,这些纳米颗粒的平均粒径分别为117.8nm、149.0nm、139.3nm和159.0nm,其zeta电位分别为-12mV、-18.5mV、-0.371mV和-5.36mV。所有纳米颗粒均为球形。NP-FEXO、Apt-NP-FEXO对FEXO的包裹率分别为31.06％、32.75％,且均具有药物缓释作用。通过流式细胞术、荧光显微镜及共聚焦显微镜观察到，CTLA-4aptamer修饰的纳米颗粒能够与CTLA-4阳性的细胞相结合。CFSE-MLR实验发现，与NP相比，Apt-NP、Apt-NP-FEXO能够在一定程度上促进淋巴细胞的增殖。MTS实验发现，与游离的CTLA-4aptamer类似，Apt-NP和Apt-NP-FEXO能够显著提高淋巴细胞对肿瘤细胞的杀伤作用。动物实验显示，与游离的aptamer相比，Apt-NP能够显著增强对肿瘤的抑制作用;而与Apt-NP相比，Apt-NP-FEXO能够进一步显著提升抗肿瘤疗效，且未显示出明显的毒副作用。<br>　　结论:本课题将ICB疗法与能够调节TIME的药物联用，构建了一种表面连有CTLA-4aptamer、内部包载FEXO的白蛋白纳米颗粒(Apt-NP-FEXO),能够显著增强抗肿瘤疗效，在肿瘤的免疫治疗中具有一定的应用潜能。