检索历史 清除

摘要目的:<br>　　腹膜透析(Peritoneal Dialysis,PD)是公认的治疗终末期肾病(End Stage Renal Disease,ESRD)的肾脏替代疗法，但是长期与生物不相容的腹膜透析液接触，腹膜间皮细胞会发生间皮-间充质转化(Mesothelial-Mesenchymal Transition,MMT)进而出现腹膜纤维化，导致腹膜超滤失败。因此，干预腹膜间皮细胞的MMT过程可抑制腹膜纤维化，是提高腹膜透析效率、延长腹膜透析时间的有效措施之一。<br>　　内质网是细胞内合成蛋白质的重要场所，当细胞受到某些损伤刺激时会引起内质网应激(Endoplasmic Reticulum Stress,ER stress)。ER stress 参与了多种组织器官的纤维化进程，但是目前尚未有研究证实ER stress与腹膜间皮细胞MMT及腹膜纤维化的关系。<br>　　SEL1L是E3泛素连接酶Hrd1的辅助因子，在内质网相关降解(Endoplasmic Reticulum Associated Degradation,ERAD)中发挥了关键作用，参与调控 ER stress时蛋白质的折叠和清除。已有研究报道SEL1L能参与细胞外基质的合成与控制,抑制呼吸道的重塑，但是SEL1L是否参与间皮细胞MMT过程，是否能调控腹膜透析相关腹膜纤维化过程尚不明确。因此，本课题将探究SEL1L对腹膜间皮细胞MMT及腹膜纤维化过程的作用，并且探究这种作用与ER stress的关系。<br>　　方法:<br>　　利用腹透液刺激大鼠腹膜发生纤维化，构建体内MMT模型，利用高糖刺激腹膜间皮细胞构建体外MMT模型;通过western blot、免疫组化检测体内外模型组及对照组中ER stress的激活以及SEL1L的表达;利用ER stress诱导剂衣霉素刺激腹膜间皮细胞Met-5A细胞发生ER stress,通过western blot检测MMT相关标志物的变化;在Met-5A细胞中分别利用小干扰RNA或质粒转染敲低或过表达SEL1L,通过qPCR和western blot检测MMT相关标志物和ER stress的变化,通过细胞划痕实验检测细胞迁移能力的变化;利用能够上调SEL1L表达的褪黑素处理Met-5A细胞MMT模型，通过western blot检测褪黑素对SEL1L蛋白表达的影响以及MMT相关标志物的变化。<br>　　结果:<br>　　利用腹透液和高糖刺激成功构建了体内和体外MMT模型;体内外模型组中ER stress相关指标XBP1s、CHOP的蛋白表达均显著上调，同时SEL1L的蛋白表达显著下调;ER stress诱导剂衣霉素刺激Met-5A细胞后,MMT标志物α-SMA显著上调;Met-5A细胞中，敲低SEL1L后MMT标志物α-SMA显著上调，E-Cadherin显著下调，24 h内细胞迁移能力显著增强;过表达SEL1L后，MMT标志物α-SMA和colleagen Ⅰ显著下调，并且能够抑制ER stress的激活;褪黑素能够上调SEL1L的蛋白表达，抑制腹膜间皮细胞MMT过程。<br>　　结论:<br>　　ER stress和SEL1L参与体内外腹膜间皮细胞MMT过程，ER stress促进腹膜间皮细胞发生MMT,SEL1L能够抑制ER stress,抑制腹膜间皮细胞发生MMT。本研究从体内外疾病模型中阐明了 SEL1L、ER stress和腹膜间皮细胞MMT三者之间的关系，提示SEL1L是抑制腹膜间皮细胞MMT和腹膜纤维化的潜在靶点,能够上调SEL1L蛋白表达的褪黑素可能具有一定抗腹膜纤维化作用。该研究结果为临床腹膜透析相关腹膜纤维化的治疗提供了新的靶点，并将该靶点与ER stress联系了起来，为腹膜纤维化的机制研究提供了新的方向。