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摘要OAS/RNase L 信号通路在干扰素诱导的先天性免疫抗病毒途径中占据十分重要的地位。2''-5''寡聚腺苷酸合成酶(OAS) 会在病毒入侵宿主时被诱导表达，OAS 被病毒RNA激活后，将ATP 转化为2''-5''磷酸二酯键连接的寡聚腺苷酸(2-5A)，2-5A 进一步使无活性单体核糖核酸酶L (RNase L) 二聚而活化，进而降解病毒或宿主的RNA，阻断病毒转录复制。RNase L 主要由锚蛋白重复序列结构域( ANK)、假激酶结构域(PK) 和核酸酶结构域( RNase) 共同构成的KEN 结构域组成，有研究称单独的KEN 在无2-5A 时仍具有一定的酶活性。目前测定RNase L 活力的方法主要有放射自显影法和荧光共振能量转移法。这两种方法都需要对底物RNA 进行修饰，成本较高，且放射自显影法还可能造成放射性污染。建立无需对底物进行修饰且能实时连续监测RNase L 活力的偶联酶法，将对靶向RNase L 的药物筛选和功能研究起到了极大的促进作用。<br>　　RNase L 切割RNA产生含有2''，3''-环磷酸（2''，3''-cP）的RNA片段。近期研究发现，ANGEL2可以将含2''，3''-cP的RNA转化含2''-P 的RNA，并最终释放无机磷酸。本论文将ANGEL2偶联到RNase L切割底物的反应中，利用MESG偶联酶测活体系测定无机磷酸的变化，建立了新的非放射性且成本低廉的RNase L活力实时定量监测方法，所测RNase L 的酶促反应动力学参数，与之前的测活方法所获得的参数具有可比性，且可以区分RNase L 对底物的偏好;此外还发现2-5A可以增强单独KEN结构域的酶活力;作为偶联酶ANGEL2 的活力可以用NADP 为廉价底物来测定，且ANGEL2 去磷酸化NADP 的能力远强于ANGEL1;最后获得了ANGEL1 的晶体但未能解析其结构，经比较AlphaFold预测的ANGEL1 结构与ANGEL2结构的差异，发现二者催化位点氨基酸保守，但ANGEL1表面碱性氨基酸远少于ANGEL2，因此降低了与底物RNA的亲和力。