基于miR--486--5p/ETS--1信号轴研究新风胶囊改善类风湿关节炎炎症反应的机制-论文-万方医学网

基于miR--486--5p/ETS--1信号轴研究新风胶囊改善类风湿关节炎炎症反应的机制

二维码有效期 120s

收藏纠错

摘要目的： 　　通过Apriori关联规则、随机行走模型数据挖掘方法观察新风胶囊(XFC,xinfeng capsule)与类风湿关节炎(RA,rheumatoid arthritis)患者临床炎症指标的关系，探讨XFC治疗RA的远期临床疗效;通过临床实验观察XFC对RA患者免疫指标、炎症因子、相关mRNA表达水平的影响;通过体外细胞实验研究成纤维样滑膜细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)细胞活力、增殖水平、迁移能力、凋亡水平、细胞周期、炎症因子、miR-486-5p、ETS-1 mRNA表达水平变化及XFC对其影响，从miR-486-5p/ETS-1信号轴调控炎症反应角度探索XFC治疗RA的作用机制。 　　方法： 　　2.1 临床数据挖掘研究 　　本研究收集安徽中医药大学第一附属医院风湿免疫科2022年06月至2023年03月的RA患者。对照组予以西医基础治疗，XFC组在西医基础治疗上予以XFC(一天3次，1次3粒)治疗。通过Apriori关联规则探索XFC与临床炎症指标血沉(erythrocyte sedimentation rate,ESR)、C 反应蛋白(C-reactive protein,CRP)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、血清淀粉样蛋白A(serum amyloid A,SAA)的关系，并通过随机行走模型评价XFC对上述炎症指标的远期治疗效果。 　　2.2 临床实验研究 　　按随机数字表法将RA患者分为XFC组和对照组，每组各50例。对照组患者予以来氟米特片(10mg/次，1次/天)口服治疗，XFC组在来氟米特片治疗基础上加用XFC(3粒/次，3次/日)口服治疗;疗程均为3个月。观察治疗前后类风湿因子(rheumatoid factor,RF)、抗环状胍氨酸多肽抗体(anti-CCP,anti-Cyclic Citrullinated Peptide)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)、miR-486-5p、ETS-1 的表迖水平。 　　2.3 体外细胞实验研究 　　RA及正常人关节成纤维样滑膜细胞购买赛百慷(上海)生物技术股份有限公司。细胞进行传代培养，至3代时开始实验。细胞培养24h，并在细胞达到0.70时通过Lipofectamine 2000将质粒转入细胞中。将细胞分为以下六组:FLS组、RA-FLS 组、XFC+RA-FLS 组、RA-FLS+miR-486-5p mimics-NC 组、RA-FLS+miR-486-5p mimics 组、XFC+RA-FLS+miR-486-5p mimics 组。通过双荧光素酶基因报告实验验证miR-486-5p与ETS-1的靶向关系;通过CCK-8、平板克隆实验、细胞迁移实验、流式细胞术、实时定量PCR法(real time quantitative PCR,RT-PCR)、酶联免疫吸附法(enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA)、探讨XFC对成纤维样滑膜细胞活力、增生能力、迁移水平、细胞周期、凋亡水平以及IL-1β、IL-10、miR-486-5p、ETS-1 表达水平的影响。 　　结果： 　　3.1 临床数据挖掘研究结果 　　3.1.1 Apriori关联规则观察新风胶囊与RA患者临床炎症指标的关系 　　结果显示，XFC的使用与ESR、CRP、SAA、VEGF的降低有强关联关系。 　　3.1.2 随机行走模型观察新风胶囊对RA患者临床炎症指标的远期疗效 　　结果显示，XFC组CRP、ESR、VEGF在改善系数方面均优于对照组。 　　3.2 临床实验研究结果 　　3.2.1 RA组与正常组RF、anti-CCP、IL-1β、IL-10表达水平比较 　　相较于正常组，RA组RF、anti-CCP、IL-1β水平明显升高，IL-10水平明显降低(P＜0.01)。 　　3.2.2 RA组与正常组miR-486-5p、ETS-1 mRNA表达水平比较 　　相较于正常组，RA组miR-486-5p mRNA表达水平明显升高，ETS-1 mRNA表达水平明显降低(P＜0.01)。 　　3.2.3 RA 患者中 miR-486-5p、ETS-1 mRNA 表达水平与 IL-1β、IL-10、RF、anti-CCP水平的相关性 　　RA患者中miR-486-5p与RF、IL-1β呈正相关;ETS-1与IL-10呈正相关(P＜0.01)。 　　3.2.4 XFC的临床疗效 　　观察组总有效率高于对照组(P＜0.01)。 　　3.2.5 观察组与对照组治疗前后RF、anti-CCP水平变化情况 　　与治疗前相比，两组患者治疗后RF、anti-CCP水平明显降低(P＜0.05或P＜0.01）;与对照组治疗后相比，治疗后观察组RF、anti-CCP水平改变优于对照组（P＜0.01）。 　　3.2.6 观察组与对照组治疗前后IL-1β、IL-10水平变化情况 　　与治疗前相比，两组患者治疗后IL-1β水平明显降低，IL-10水平明显升高（P＜0.01）;治疗后观察组IL-1β、IL-10水平改变优于对照组（P＜0.01）。 　　3.2.7 观察组与对照组治疗前后miR-486-5p、ETS-1 mRNA水平变化情况 　　与治疗前相比，两组患者治疗后miR-486-5p mRNA表达水平明显降低，ETS-1 mRNA表达水平明显升高（P＜0.01）;治疗后观察组miR-486-5p、ETS-1 mRNA表达水平改变优于对照组（P＜0.05或P＜0.01）。 　　3.3 细胞实验研究结果 　　3.3.1 双荧光素酶基因报告实验检测miR-486-5p与ETS-1的靶向关系 　　结果表明，miR-486-5p对ETS-1野生型3''UTR报告基因的荧光素酶活性有抑制作用，而对ETS-1突变型3''UTR则无抑制作用。 　　3.3.2 最佳含药血清的筛选 　　20％体积分数的XFC含药血清对成纤维样滑膜细胞活力抑制作用最为明显。 　　结论： 　　4.1 XFC对RA患者临床炎症指标有较好的远期改善效果。XFC的使用与ESR、CRP、VEGF、SAA的降低有强关联关系;XFC组CRP、ESR、VEGF在改善系数方面均优于对照组。 　　4.2 RA 患者体内 RF、anti-CCP、IL-1β、miR-486-5p 水平明显升高，IL-10、ETS-1水平明显降低。RA患者中miR-486-5p与RF、IL-1β呈正相关;ETS-1与IL-10呈正相关。这提示RA患者体内存在免疫炎症反应以及mRNA表达的失衡，miR-486-5p、ETS-1与免疫炎症反应关系密切。 　　4.3 观察组总有效率高于对照组。治疗后观察组RF、anti-CCP、IL-1β、IL-10、miR-486-5p、ETS-1水平改变均优于对照组。以上结果说明XFC对RA患者免疫炎症反应确切的改善作用。 　　4.4 XFC改善RA成纤维样滑膜细胞炎症反应的作用机制: 　　4.4.1 XFC可促使成纤维样滑膜细胞活力、增殖水平、迁移水平、S+G2期细胞比例下降，凋亡水平上升，从而减少成纤维样滑膜细胞产生。 　　4.4.2 XFC可抑制促炎因子IL-1β的表达，同时促进抑炎因子IL-10的表达，平衡炎症反应。 　　4.4.3 miR-486-5p靶向抑制ETS-1，XFC通过抑制miR-486-5p表达从而促进ETS-1表达，进一步改善成纤维样滑膜细胞的炎症状态。