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摘要胃癌(Gastric cancer,GC)是世界范围内严重威胁人类健康的疾病之一。根据2022年美国国家综合癌症网络（National Comprehensive Cancer Network，NCCN）发布的报告显示，胃癌已成为当今世界因肿瘤导致死亡的第三大原因，并且由于胃癌患者在疾病发现时通常已经处于疾病进展期，患者的预后通常较差。由于胃癌的高发病率和死亡率，其已成为全球关注的公共健康问题。肿瘤干样细胞(Cancer stem-like cells，CSCs)是肿瘤中的细胞亚群，具有自我更新和分化成肿瘤细胞的能力，其在肿瘤的发生发展、复发及治疗抵抗等方面发挥重要作用。B7-H3是B7家族中的一员，多个研究表明B7-H3可通过促进肿瘤细胞发生上皮-间质转化(Epithelial-mesenchymal transition，EMT)、促进血管生成以及化疗抵抗等方式来发挥促肿瘤作用。然而，目前对于B7-H3如何调控肿瘤细胞干性特征仍不明确。<br>　　目的:<br>　　本研究旨在研究B7-H3对胃癌干性的影响，并进一步探究B7-H3调控胃癌干性的机制，从而为胃癌患者的治疗提供新思路。<br>　　方法:<br>　　1.通过荧光定量PCR技术、Western blot技术、以及流式细胞术检测B7-H3敲低后HGC-27和MKN-28细胞系中干性相关分子的表达的变化情况;用成球试验检测B7-H3敲低后细胞成球能力的变化。<br>　　2.B7-H3敲低后胃癌细胞干性特征的体内验证:以注射的细胞量(1×106、1×105)为标准将实验进行分组，将B7-H3敲低(shB7-H3)的HGC-27细胞和正常HGC-27细胞采用皮下注射的方式分别打入裸鼠的左/右侧腹股沟淋巴结处，记录肿瘤重量以及成瘤情况。<br>　　3.通过非靶向代谢组学检测正常胃癌细胞和B7-H3敲低的胃癌细胞中不同代谢物含量的差异，通过生物信息学方法找出差异代谢产物，并通过代谢通路富集分析找寻差异代谢通路。<br>　　4.应用荧光定量PCR技术检测GSH代谢相关基因表达变化情况，用GSH及GST检测试剂盒检测GST含量及GST酶活力的变化，用DHE探针检测细胞内活性氧含量的变化。<br>　　5.用GSH合成抑制剂Buthionine Sulfoximine(BSO)处理过表达B7-H3胃癌细胞系，分析B7-H3是否通过影响GSH代谢进而影响胃癌细胞干性。<br>　　6.应用Western blot技术检测敲低B7-H3后胃癌细胞中Nrf2表达变化情况;用AKT抑制剂Perifosine探究B7-H3是否通过AKT通路影响Nrf2表达，进而影响GSH代谢以及胃癌细胞干性。<br>　　7.通过多重荧光免疫组织化学技术（mIHC）检测B7-H3、Nrf2、CD44在人体胃癌组织及癌旁组织的表达。采用t检验分析B7-H3在胃癌组织中的表达与胃癌患者临床病理资料的相关性;采用Pearson相关性分析对胃癌患者中B7-H3与CD44、B7-H3与Nrf2、CD44与Nrf2表达进行相关性分析;采用Kaplian-Meier法分析B7-H3+CD44+Nrf2+％细胞占比高的组以及B7-H3+CD44+Nrf2+％细胞占比低的组患者生存预后的差别。<br>　　结果:<br>　　1.敲低B7-H3后，HGC-27和MKN-28细胞中干性相关分子(CD44、CD133、Sox2)的表达下调(P＜0.05)，成球能力下降(P＜0.05)。<br>　　2.裸鼠体内实验表明，与正常胃癌细胞相比，B7-H3敲低的胃癌细胞体内成瘤能力更弱(P＜0.001)，并且低浓度细胞梯度(1×105)比高浓度细胞梯度(1×106)注射于裸鼠皮下形成的肿瘤体积更小，重量更轻(P＜0.05)。<br>　　3.非靶向代谢组学结果显示，以FC≥2或≤0.5，q＜0.05为标准，B7-H3敲低的细胞中还原性谷胱甘肽、谷氨酰半胱氨酸等代谢物的含量显著降低;代谢通路富集分析结果显示谷胱甘肽代谢通路在正常胃癌细胞中和B7-H3敲低的胃癌细胞中存在差异(P＜0.05)。<br>　　4.通过荧光定量PCR等方法对代谢组学结果进行验证，结果显示敲低B7-H3后胃癌细胞中GSH代谢相关基因表达下调(P＜0.05)，GSH含量及GST酶活力下降(P＜0.05)，ROS含量下降(P＜0.05)。<br>　　5.采用BSO处理后，过表达B7-H3的胃癌细胞CD133表达、成球能力下降(P＜0.05)，并且用BSO处理裸鼠可以抑制过表达B7-H3的胃癌细胞在其体内的成瘤能力(P＜0.05)。<br>　　6.Western blot结果表明，Nrf2在B7-H3敲低的胃癌细胞中表达显著降低;使用AKT抑制剂可抑制胃癌细胞Nrf2表达，GSH代谢相关基因表达，GSH含量，GST酶活性以及细胞内ROS含量(P＜0.05);使用AKT抑制剂抑制胃癌细胞干性特性(P＜0.05)。<br>　　7.研究共纳入74名胃癌患者，mIHC结果显示，B7-H3分子在癌组织中的表达显著高于癌旁(P＜0.001)，B7-H3、CD44、Nrf2分子间的表达均呈正相关关系(P＜0.05)，B7-H3-CD44+Nrf2+％细胞占比高组患者的生存预后差于B7-H3+CD44+Nrf2+％细胞占比低组的患者(P＜0.05)。<br>　　结论:<br>　　1.B7-H3可以促进胃癌的干性特性;<br>　　2.B7-H3通过促进GSH代谢来维持胃癌的干性特性;<br>　　3.B7-H3通过AKT/Nrf2通路调控胃癌细胞中GSH代谢;<br>　　4.共表达B7-H3及干性相关分子与胃癌患者的不良预后有关。