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摘要背景和目的<br>　　牙周炎是一种炎症性疾病，可造成牙周组织的破坏。龈下刮治和根面平整（scalingandrootplaning,SRP）是牙周炎治疗的重要程序，但其炎症控制效果受到多种因素的影响，且难以实现牙周再生。宿主的免疫反应在炎症的进展和消退、组织的破坏与修复中发挥了双刃剑的作用。因此，在SRP的基础上局部应用免疫调节制剂，促使宿主的免疫反应向有利于炎症消退和组织再生的方向倾斜，可能是一种具有广阔前景的牙周治疗思路。<br>　　颗粒蛋白前体（progranulin,PGRN）是一种自分泌生长因子，具有抗炎、免疫调节和促进组织修复的作用。在前期研究工作中，本课题组发现PGRN能通过NF-κB/MAPK信号通路抑制巨噬细胞向M1型极化，促进其向M2型极化;PGRN通过与肿瘤坏死因子受体2结合激活了JNK信号通路，进而促进人牙周膜干细胞的成骨分化;通过手术将负载PGRN的胶原膜置入大鼠的牙周炎性骨缺损中，发挥了抗炎、抑制骨吸收并促进成骨的作用。然而，PGRN是否可作为SRP的非手术辅助治疗方法，同时实现抗炎、免疫调节和促牙周再生，目前尚不清楚。另外，根分叉病变是牙周炎常见的伴发病变，其治疗难度较大、预后较差。改进PGRN的给药方式，从而在非手术条件下能够将PGRN应用于根分叉病变等难治性病例中以消除炎症并促进牙周再生，也是具有重要临床意义的探索方向。<br>　　甲基丙烯酰化明胶（gelatinmethacryloyl,GelMA）是一种光交联水凝胶，作为药物载体已被广泛应用于组织工程领域。因此，本研究旨在利用比格犬Ⅱ度根分叉病变模型，在SRP的基础上，将PGRN/GelMA复合物龈下注射到根分叉缺损内并光照固化，来评估PGRN在抗炎、免疫调节和促牙周再生方面的疗效。材料与方法<br>　　1.将PGRN粉末溶解于GelMA溶液，固化光源照射后形成PGRN/GelMA复合物。体外检测PGRN/GelMA复合物每日释放的PGRN浓度，持续7天。<br>　　2.将8只雄性比格犬的下颌双侧第三、第四前磨牙（P3、P4）作为实验牙位，通过手术去骨以及术后诱导4周建立Ⅱ度根分叉病变模型。将实验牙位分为四组:（a）空白组;（b）SRP组;（c）SRP+GelMA组;（d）SRP+PGRN/GelMA组。空白组不做任何处理;SRP组在建模成功后立即进行一次SRP;SRP+GelMA组和SRP+PGRN/GelMA组在进行一次SRP后，使用微型注射器将GelMA溶液或PGRN/GelMA溶液注射于根分叉缺损处并光照固化。<br>　　3.在建模术前、治疗前、治疗后第8周，记录各组实验牙颊侧的出血指数(bleedingindex,BI)、探诊深度(probingdepth，PD)、牙龈退缩深度(gingivalrecessiondepth,GRD)和临床附着丧失(clinicalattachmentloss,CAL)。<br>　　4.治疗后第8周，取各组实验牙颊侧龈沟液和牙龈组织，通过酶联免疫吸附测定(enzyme-linkedimmunosorbentassay，ELISA)和实时定量逆转录聚合酶链式反应(reversetranscription-quantitativereal-timepolymerasechainreaction,RT-qPCR),检测龈沟液和牙龈组织中免疫细胞相关标志物以及促炎、抗炎因子的表达;取P3、P4组织块进行微计算机断层扫描(microcomputedtomography,Micro-CT)和苏木素-伊红(hematoxylinandeosin，H&E)染色，通过影像学和组织学分析来评估根分叉缺损区牙周再生。<br>　　结果<br>　　1.成功制备PGRN/GelMA复合物，体外药物释放实验表明PGRN/GelMA复合物在检测第三天释放的PGRN浓度最高，在一周内共释放了总含量的92％。<br>　　2.建模术后第4周，各组的BI、PD、GRD、CAL较术前均显著增加且超出正常范围，各组间指标无统计学差异，提示成功建立比格犬Ⅱ度根分叉病变模型。<br>　　3.治疗后第8周，牙周指标分析结果提示SRP+PGRN/GelMA组的BI、PD、CAL较其他组显著降低;ELISA和RT-qPCR结果显示SRP+PGRN/GelMA组的M1巨噬细胞和Th17细胞相关标志物以及促炎因子的表达与其他组相比显著下降，M2巨噬细胞和Treg细胞相关标志物以及抗炎因子的表达与其他组相比显著增加;影像学和组织学分析结果显示SRP+PGRN/GelMA组根分叉缺损区的新骨体积和新牙骨质长度较其他组显著增加。<br>　　结论<br>　　龈下应用PGRN/GelMA复合物在比格犬Ⅱ度根分叉病变中发挥了抗炎、免疫调节和促牙周再生作用，有望成为临床SRP的非手术辅助疗法，实现微创、高效的牙周治疗效果。