换一批摘要该文在以前完成的一级序列和基本生物学活性分析的基础上研究并阐明了HWTX-Ⅱ的二硫键配对方式和溶液三维结构,对其生理功能也进行了一定探索.(1)该文设计了一种Edman降解N端测序和原位巯基修饰反应相结合的新的二硫键定位方法,应用该法分别证明了Cys4-Cys18以及Cys8-Cys29配对,剩余的一对即Cys23-Cys34,由此确定了HWTX-Ⅱ三对二硫键Ⅰ-Ⅲ、Ⅱ-Ⅴ和Ⅳ-Ⅵ的连接方式.在HWTX-Ⅱ的胰酶酶解过程中发现有二硫键交换反应,对不同情况下二硫键交换反应的机制做了讨论.(2)溶液三维结构的2D<'1>HNMR研究.通过分析水及重水DQF-COSY、COSY、TOCSY和NOESY等系列NMR谱,识别出HWTX-Ⅱ全部37个氨基酸残基自旋体系,完成了序列专一的谱峰归属,确认了所有主链质子和大于95﹪的侧链质子的化学位移.592个非冗余质子间NOE距离约束和16个二面角约束应用于XPLOR程序,通过距离几何和模拟退火的方法进行结构计算,得到一组收敛性较好的结构,从中挑选了10个代表HWTX-Ⅱ的结构.通过与蜘蛛、芋螺及其他来源的多种毒素和抑制活性肽所广泛采用的结构框架—抑制剂胱氨酸结(ICK)模体分子的结构进行比较,表明HWTX-Ⅱ未形成胱氨酸结,不属于ICK模体,而是蜘蛛毒素分子中在ICK模体之外的一种新的结构框架.(3)生物学功能探索.分别调查了HWTX-Ⅱ对昆虫和哺乳动物的活性,以及在小鼠隔神经膈肌和大鼠输精管标本、大鼠背根神经节神经元的电压门控的钠电流和钙电流等不同电生理实验模型上的效应,未能确定该毒素的靶作用位点,但结果为后来者提供了一定的参考.
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