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摘要研究背景及目的<br>　　高泌乳素血症(Hyperprolactinemia,HPRL)是一种泌乳素(Prolactin，PRL)异常升高的内分泌疾病，临床表现为泌乳、经期紊乱甚至不孕不育，给患者带来巨大的痛苦。临床常用的治疗手段多为口服多巴胺激动剂，依赖于多巴胺受体(DopamineD2receptor,D2DR)发挥作用，但此类药物容易产生药物抵抗或者患者耐受性不佳。有文献报导，膜孕激素受体α(membraneprogestinreceptorα,mPRα)和雌激素受体α(EstrogenReceptorα,ERα)与泌乳素的分泌密切相关，可能成为非依赖性D2DR治疗HPRL治疗的新靶点。由经典古方芍药甘草汤改良而成的抑乳调经颗粒(YiruTiaojingGranule,YRTJ),在临床上对HPRL疗效显著，但其非依赖性D2DR调节PRL的机制仍未阐明。因此，本课题拟通过体外与体内实验探讨抑乳调经颗粒的治疗作用是通过激活mPRα抑制ERα而实现。另外，YRTJ也可治疗由长期服用奥氮平而引起的高泌乳素血症，但两者联合用药缺乏相应的药代动力学数据支撑。为此，通过对动物进行多种剂量给药方案，为临床合理应用YRTJ提供新的证据。<br>　　研究方法<br>　　通过测定GH3细胞上清液的PRL水平以及mPRα、ERα以及活化T细胞核内因子1(nuclearfactorofactivatedT-cells,NFAT1)的mRNA和蛋白表达的变化来探讨它们参与YRTJ抑制PRL的分子机制。为进一步确认mPRα与ERα的调控作用，通过siRNA沉默mPRα，测定ERα的相关表达。为了考察NFAT1与ERα的关系，使用ChIP以及荧光共定位技术，测定NFAT1与ERα启动子区的结合情况以及在细胞中的分布情况。最后，使用奥氮平诱导HPRL大鼠模型，并使用YRTJ对其进行治疗，并测定垂体组织的相关mRNA和蛋白表达。<br>　　建立奥氮平生物样本的LC-MS/MS检测方法，考察不同分组给药处理后大鼠体内奥氮平的血药浓度，对药代动力学参数进行计算并比较。通过Caco-2细胞模型进行双向转运实验，研究YRTJ对奥氮平的吸收转运影响。通过测定大鼠体内的CYP2D1、CYP1A2蛋白表达，考察不同给药剂量对于体内代谢酶的影响。<br>　　研究结果<br>　　体外实验中，YRTJ给药后，与对照组相比，GH3细胞上清液PRL显著下降;细胞中NFAT1、ERα的mRNA与蛋白表达显著下降，mPRαmRNA与蛋白表达显著上升;沉默mPRα后，与对照组相比，实验组ERα的mRNA显著升高;转录因子NFAT1与ERα启动子区存在结合;NFAT1、ERα在细胞核以及细胞质中均有分布，给药后，ERα和NFAT1主要在细胞质以及细胞核膜上分布。<br>　　体内实验中，本研究使用奥氮平建立了HPRL大鼠模型。YRTJ降低了模型组大鼠血浆中异常升高的PRL,上调垂体中mPRα的表达，下调NFAT1、ERα的蛋白表达。<br>　　相对于奥氮平单独给药，在YRTJ预处理组中，YRTJ与奥氮平联合给药使奥氮平在大鼠体内暴露量减少，吸收减慢而作用时间缩短;在多剂量组中，两组大鼠体内奥氮平暴露量相当。本研究成功建立了Caco-2体外细胞模型，给予药物后测得PDR值为0.98。与单独给药奥氮平相比，YRTJ预处理组联合给药降低了肝脏中CYR2D1以及CYP1A2的蛋白表达，而多剂量组中升高了肝脏中CYR2D1以及CYP1A2的蛋白表达，但均无统计学差异。<br>　　结论<br>　　通过本研究发现，YRTJ可以通过非依赖性D2DR途径下调PRL的分泌，这一作用是通过激活mPRα下调ERα来实现的。当YRTJ与奥氮平长期联合使用时，对奥氮平原有的药代学动力过程没有显著影响，为临床使用YRTJ提供了新的科学依据。