换一批摘要P-选择素（P-selectin）是细胞粘附分子选择素家族的主要成分,是急性炎症早期介导炎症细胞向受损部位趋集过程中的重要因素.进一步阐明P-selectin结构与功能及其在肾脏疾病等病理机制中的作用,并为针对其的临床特异性抗粘附治疗奠定基础.为此我们设计并进行了以下的研究.利用PT-PCR技术,该研究首先从人外周血血小板中克隆出P-selectincDNA,并扩增和获得了其中Lectin片段及Lectin-EGF片段,然后将目的基因分别插入含有Kan的质粒pET42b（+）中和含有Amp的质粒pcDNA4/HisMaxA中.再将含有目的基因的重组质粒转化入DH5α中进行大量扩增并鉴定.经测序发现,所获目的基因序列与相关文献和GeneBank（登录号M25322）序列完全一致.将含有目的基因的重组质粒分别在真核表达系统CHO和原核表达系统BL21中进行表达,利用限制性酶切、测序以及蛋白印迹检测发现目的基因均能表达.但在真核表达系统中的表达水平偏低.选择了原核表达系统BL21.将一定量表达的目的蛋白通过Ni-NTA柱进行纯化,得到mg级纯化的蛋白,通过SDS-PAGE电泳、ELISA、WesternBlot方法证明所获蛋白即为目的蛋白.利用杂交瘤技术先行制备了抗人P-selectinLectin-EGF单克隆抗体.并通过ELISA方法,证实所获单克隆抗体能与P-selectin抗原、及其Lectin、Lectin-EGF片段特异性反应;通过间接细胞免疫荧光染色和流式细胞仪检测.两个试验均证实了该研究所制备的单克隆抗体的特异性.进一步通过细胞粘附试验,证明所获单克隆抗体具有阻断经凝血酶刺激活化的血小板与嗜中性粒细胞结合的活性.
更多相关知识
作者
学术成果认领
导师
周同
学位信息：
上海第二医科大学上海交通大学医学院;上海交通大学
临床医学
内科学(肾脏病)（硕士）
2002年
发布时间
2004-04-08（万方平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
- 浏览25
- 被引0
- 下载0
相似文献
- 中文期刊
- 外文期刊
- 学位论文
- 会议论文
