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摘要目的<br>　　1.总结中枢性性早熟(centralprecociouspuberty,CPP)的中西医研究进展，分析其病因病机，探讨九味楮实方治疗中枢性性早熟的潜在作用机制。<br>　　2.探讨九味楮实方治疗CPP的作用及机制，为九味楮实方治疗CPP提供科学依据。<br>　　方法<br>　　第一部分文献研究:检索阅读国内外关于性早熟、中枢性性早熟的文章，重点关注性早熟的病因、机制、药物研究进展;性早熟的中医病因病机，中医药治疗性早熟研究进展;分析九味楮实方组方依据、研究基础，挖掘九味楮实方治疗CPP的潜在作用机制。<br>　　第二部分九味楮实方对中枢性性早熟模型大鼠的治疗作用及代谢的调节作用研究:<br>　　1.九味楮实方对CPP模型大鼠的治疗作用研究:①制备九味楮实方浸膏剂。②实验选用雌性仔鼠60只，随机分为6组，即正常对照组、CPP模型组、戈那瑞林组、九味楮实方高剂量组、九味楮实方中剂量组、九味楮实方低剂量组，每组10只。26日龄时皮下注射N-甲基-DL-天冬氨酸(N-Methyl-DL-AsparticAcid,NMA)建立中枢性性早熟模型。正常对照组和CPP模型组给予生理盐水1.0ml灌胃;九味楮实方高、中、低剂量组分别给予九味楮实方浸膏剂5.75ml/Kg、2.87ml/Kg、1.43ml/Kg灌胃，戈那瑞林组给予戈那瑞林100μg/Kg皮下注射。③观察记录大鼠阴道口开放日龄及动情周期情况，当模型组大鼠阴道口开放动物超过半数(＞50%)时终止实验。④ELISA法检测大鼠血清LH、FSH、E2水平。⑤光镜观察大鼠子宫、卵巢组织形态改变，计算子宫、卵巢系数。<br>　　2.九味楮实方对CPP模型大鼠代谢的调节作用研究:①观察九味楮实方对CPP模型大鼠摄食量和体重的影响。②全自动生化分析仪检测大鼠血清T-CHO、TG、LDL-C、GLU水平。③ELISA检测大鼠血清FT3、FT4、INS、IGF-1、IGF-1R水平。<br>　　第三部分九味楮实方抑制IGF-1-PI3K-AKT信号通路治疗中枢性性早熟的作用机制研究<br>　　1.动物实验:实验选用21日龄刚离乳雌性SD大鼠40只。随机分为4组，即正常对照组、CPP模型组、戈那瑞林组、九味楮实方组，每组10只。26日龄时皮下注射NMA建立CPP大鼠模型。对照组和CPP模型组给予生理盐水1.0ml/d灌胃;戈那瑞林组给予戈那瑞林100μg/kg·d皮下注射;九味楮实方组给予九味楮实方浸膏剂5.75ml/Kg·d灌胃。当模型组大鼠阴道口开放动物超过半数(＞50％）时终止实验。①q-PCR检测大鼠下丘脑GnRH、KiSS1、GPR54、TAC3、IGF-1、IGF-1RmRNA相对表达量;②WesternBlot检测大鼠下丘脑GnRH、Kisspeptin、GPR54、NKB、NK3R、IGF-1、IGF-1R、PI3K、AKT、p-PI3K、p-AKT蛋白表达情况。<br>　　2.细胞实验:①构建IGF-1过表达质粒转染小鼠下丘脑GT1-7细胞，建立IGF-1过表达下丘脑细胞模型，给予PI3K抑制剂LY294002进行干预。②分组:A.GT1-7组:GT1-7细胞+空载质粒;B.GT1-7+LY组:GT1-7细胞+空载质粒+LY294002;C.GT1-7+IGF-1组:GT1-7细胞+IGF-1过表达载体质粒;D.GT1-7+IGF-1+LY组:GT1-7细胞+IGF-1过表达载体质粒+LY294002。③q-PCR检测各组细胞KiSS1、TAC3、GnRHmRNA表达情况。④WesternBlot检测各组细胞IGF-1、p-PI3K、p-AKT、Kisspeptin、NKB、GnRH蛋白表达情况。<br>　　结果<br>　　1.基于“肝肾同治”理论基础上的九味楮实方，与性早熟的病因病机相契合，是治疗性早熟的有效方剂。<br>　　2.CPP模型组大鼠阴道口开放时间提前、卵巢可见成熟卵泡及黄体，子宫系数增加，血清LH、E2水平升高;九味楮实方可有效延缓CPP模型大鼠阴道口开放，延缓卵泡发育成熟和黄体生成，抑制子宫过度增长，降低CPP模型大鼠血清LH、E2水平。<br>　　3.CPP模型大鼠血清TG水平升高，九味楮实方可降低CPP模型大鼠血清TG水平，但各组间T-CHO、LDL-C、GLu水平无明显差异。与对照组比较，CPP模型组大鼠血清FT3、FT4、INS、IGF-1、IGF-1R水平升高;九味楮实方高、中、低剂量组均可降低CPP模型大鼠血清INS、IGF-1、IGF-1R水平，且对IGF-1的调节作用具有剂量依赖性;高剂量的九味楮实方可降低CPP模型大鼠血清FT3、FT4水平。<br>　　4.CPP模型组大鼠下丘脑GnRH、KiSS1、TAC3、GPR54、IGF-1、IGF-1R表达水平均升高;九味楮实方可下调CPP模型大鼠下丘脑GnRH、KiSS1、TAC3、GPR54、IGF-1、IGF-1R的表达。<br>　　5.CPP模型组大鼠下丘脑PI3K、AKT蛋白表达水平无明显变化，但磷酸化蛋白p-PI3K、p-AKT水平升高;九味楮实方可抑制CPP模型大鼠下丘脑磷酸化p-PI3K、p-AKT蛋白的表达。<br>　　6.过表达IGF-1质粒转染小鼠下丘脑GT1-7细胞后，细胞表达IGF-1、p-PI3K、p-AKT、KiSS1、Kisspeptin、TAC3、NKB、GnRH水平升高;PI3K抑制剂LY294002可抑制p-PI3K、p-AKT、KiSS1、Kisspeptin、TAC3、NKB、GnRH的表达。<br>　　结论<br>　　1.NMA可成功建立CPP大鼠模型，成模率较高，成模时间较快;NMA可促进大鼠性腺器官的发育，子宫生长速度较快，变化最为明显。<br>　　2.九味楮实方可有效延缓NMA诱导的CPP模型大鼠阴道口开放及进入规律的性周期的时间，并可抑制子宫的过度生长及卵泡发育成熟，降低CPP模型大鼠血清E2、LH的水平，有效治疗中枢性性早熟。<br>　　3.中枢性性早熟模型大鼠存在代谢异常，表现为血TG水平升高，血清FT3、FT4、INS、IGF-1、IGF-1R水平增加。TG可能是性早熟早期代谢异常的敏感指标。九味楮实方可降低CPP模型大鼠升高的TG水平，调节CPP模型大鼠血清代谢相关激素水平。<br>　　4.CPP模型大鼠下丘脑IGF-1表达水平升高，神经肽KiSS1、Kisspeptin、GPR54、TAC3、NKB、NK3R及GnRH表达增加，PI3K-AKT信号通路活化。九味楮实方可降低CPP模型大鼠下丘脑IGF-1的表达，抑制PI3K-AKT信号通路的活化，下调KiSS1、Kisspeptin、GPR54、TAC3、NKB、NK3R及GnRH的表达。<br>　　5.IGF-1通过PI3K-AKT信号通路调节下丘脑神经肽及GnRH的表达，参与中枢性性早熟的发生。