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摘要根据中国疾病预防控制中心和国家统计局联合发布数据显示，2022年全国病毒性肝炎发病人数1,105,865人，发病率(1/10 万)达到78.40％,发病人数位于中国甲乙类法定报告传染病发病人数及发病率榜单之首。病毒性肝炎所导致的重症肝炎病情凶险，死亡率高。一旦病程迁延容易转为慢性肝炎，病情反复发作，易恶化为肝硬化、肝癌等恶性肝脏疾病。在临床治疗过程中，治愈难度极大。肝纤维化是病毒性肝炎、肝硬化等肝脏疾病前期发展所经历的重要病理过程。在肝纤维化阶段进行药物治疗可以达到防患于未然的作用。而目前是市面上并没有抗纤维化的特效药，大部分抗肝纤维化药物(如LY2157299)仍然处于临床研究阶段，存在毒副作用大等缺陷。因此抗肝纤维化药物研究对控制肝脏疾病发展和治疗肝脏疾病具有重大意义。<br>　　研究发现:TGF-β/Smad通路与细胞外基质沉积密切相关，并促进纤维化的形成，已被确定为肝纤维化的强大驱动信号。当TGF-β过表达时就会导致肝纤维化的形成。ALK5是TGF-β信号转导的关键节点，ALK5抑制剂通过抑制TGF-β1/Smad信号通路起抗肝纤维化作用。通过大量文献查阅和实验室前期工作发现，含有喹喔啉、喹啉、吡唑、咪唑、吡啶、醚类和酯类结构的化合物显示较好的ALK5抑制活性和抗纤维化活性。本实验利用拼合原理，设计合成了含喹喔啉和喹啉结构的醚类(37a-i和38a-i)和酯类衍生物(39a-f和40a-f),并进行了 ALK5激酶抑制活性评价。令人惋惜的是，这些衍生物没有显示预期的ALK5抑制活性(IC50＞1 μM)。根据前期的工作和本实验结果分析，本课题组认为侧链上引入醚类或酯类没有与关键氨基酸结合减弱了 ALK5抑制活性。<br>　　基于以上的结果和分析，本课题组在含喹喔啉和喹啉结构的醚类和和酯类衍生物侧链上引入了胺基合成了 43a和44a，并进行了 ALK5抑制率测定。研究结果提示，这两种化合物与第一阶段合成的醚类和酯类衍生物相比ALK5抑制活性显著提高，进一步证明了侧链上引入胺基的合理性。根据喹啉化合物44a的ALK5抑制率高于喹喔啉化合物43a的结果，我们进一步衍生化了 44系列化合物(44a-g),并测定其ALK5抑制活性。研究结果显示，所合成的所有化合物均明显提高了 ALK5抑制活性。其中，间位甲基取代的化合物44f(IC50=0.267μM)显示了最高的ALK5抑制活性，其活性接近于阳性对照化合物LY-2157299(IC50=0.129 μM)。此外，化合物44f对p38α激酶的选择性指数(selective index,SI＞3)也接近于阳性对照化合物LY-2157299(SI=4)。为了验证胺类化合物(44a-g)和醚类或酯类化合物的ALK5活性活性差异，还做了分子对接试验。对接实验结果提示，侧链上的胺基与关键氨基酸有氢键结合，而醚类的氧原子没有结合，进一步验证了设计思路的可靠性。<br>　　为了探究醚类(37a-i和38a-i)和酯类化合物(39a-f和40a-f)是否存在可应用于其他领域的靶点，从醚类和酯类化合物中分别选取化合物38d和40b做了网络药理学研究。研究结果表明，化合物38d和40b可能参与氧化反应、细胞增殖调控、稳态过程、炎症及肿瘤细胞信号转导相关的基因调控，可用于抗癌及抗炎作用的研究。<br>　　通过本研究发现含喹啉和喹喔啉结构的衍生物的侧链中引入胺基相比于醚基或酯基更适合于提高ALK5抑制活性。本研究结果为含喹啉和喹喔啉结构的胺类衍生物的研究提供了思路和理论基础。