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摘要目的：<br>　　口腔鳞状细胞癌(Oral Squamous Cell Carcinoma,OSCC)是全球最常见的恶性肿瘤之一，约占约占口腔癌的90％,具有较高的发病率和死亡率。随着医疗技术的发展，目前恶性肿瘤的治疗方式已经由传统的手术、化疗、放疗等发展至免疫治疗、靶向治疗等。但目前OSCC患者的5年生存率仍较低，约为65％。对于恶性肿瘤而言，早发现、早诊断、早治疗，特别是选择有效的治疗方法，能有效改善患者预后和提高治愈率。因此，研究OSCC治疗的新靶点以提高OSCC患者的生存率是一项亟待解决的任务。<br>　　跨膜 Emp24 蛋白转运结构域 3 (transmembrane emp24 domain- containing protein 3,TMED3)是一种负责细胞内蛋白质运输的Ⅰ型跨膜蛋白。该蛋白在内质网-高尔基体分泌途径中起着重要的运输功能，参与细胞内蛋白质的运输和定位。它属于TMED家族，TMED家族蛋白不仅在人类各器官及机体正常发育过程中起着关键作用，如胚胎发育、生殖系统发育、调控内分泌系统等，而且也与某些疾病的发生发展相关，如恶性肿瘤、神经退行性病变、内分泌疾病等。已有研究表明，TMED3在恶性肿瘤的发生发展中具有促癌或者抑癌作用，并且与患者预后甚至癌症耐药相关。本实验的目的即研究TMED3与OSCC的关系，为OSCC的治疗提供新的治疗靶点。<br>　　方法：<br>　　1.使用 GeneChip Primeview Human PathArrayTM 技术检测 OSCC 组织和癌旁组织中基因表达情况并统计分析基因表达的差异，筛选出差异倍数( |Fold Change|)大于等于1.3且错误发生率(false discovery rate,FDR)小于0.05的基因。剔除已经在OSCC中研究过的基因，得到备选的目的基因以备后续研究。<br>　　2.使用qPCR技术检测上述操作中得到的备选目的基因(TMED3,ABRACL,CDS1,GINS1,FKBP1A,GNAI3,ARL14,HMGB3,RHOD,FAM64A)在 OSCC 细胞中的表达情况，然后构建相应的敲减目的基因细胞体系，采用Celigo细胞计数法检测 shCtrl 组、shTMED3 组、shABRACL 组、shCDS1 组、shGINS1 组、shFKBP1A 组、shGNAI3 组、shARL14 组、shHMGB3 组、shRHOD 组和 shFAM64A组OSCC细胞增殖能力，筛选出对OSCC细胞增殖能力影响最大的基因作为本研究的目的基因(TMED3)。<br>　　3.使用免疫组织化学技术检测55例OSCC组织和5例癌旁组织中TMED3蛋白质水平表达情况，并按照免疫荧光评分大于等于4.5为高表达，小于4.5为低表达的标准将各组织样本分为TMED3高表达组和TMED3低表达组。并使用符号检验分析两组标本中TMED3表达的差异。然后使用Mann-Whitney U检验分析TMED3表达水平与OSCC患者年龄、性别、病理等级、淋巴结总数、淋巴结阳性数、是否远处转移的关系。<br>　　4.使用qPCR技术检测人舌鳞状细胞癌HN-6、CAL-27、SCC-25、SCC-9细胞系中TMED3表达情况，筛选出表达水平较高的两种细胞系(CAL-27、SCC-25)用于后续研究。并使用qPCR技术和Western Blot技术检测敲减TMED3慢病毒感染的CAL-27、SCC-25细胞中TMED3 mRNA水平和蛋白质水平的表达情况。<br>　　5.使用CCK-8实验、克隆形成实验、细胞划痕实验和Transwell实验检测敲减TMED3慢病毒感染后，CAL-27和SCC-25细胞的增殖能力和迁移能力。<br>　　结果：<br>　　1.在OSCC中，TMED3 mRNA水平和蛋白质水平均高表达。<br>　　2. TMED3表达水平与OSCC患者病理分级呈正相关。<br>　　3.相比于 HN-6 和 SCC-9 细胞系，TMED3 mRNA 在 CAL-27、SCC-25 中均高表达。<br>　　4.敲减TMED3抑制CAL-27、SCC-25细胞增殖能力、迁移能力及细胞聚集性。<br>　　结论：<br>　　1. TMED3在OSCC中高水平表达并且与OSCC患者病理分级呈正相关。<br>　　2. TMED3高表达促进OSCC细胞增殖能力、迁移能力和细胞聚集性。