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摘要目的:<br>　　视神经脊髓炎(neuromyelitis optica,NMO)是一种由体液免疫紊乱介导的、细胞免疫广泛参与的、针对星型胶质细胞水通道蛋白4抗体(aquaporin-4 immunoglobulin G antibodies,AQP4-IgG)的中枢神经系统炎性脱髓鞘疾病，受累部位以视神经和脊髓为主。既往研究发现，单独输注致病性抗AQP4-IgG至动物体内并不能诱导NMO的病理改变，而与特异性T细胞共输注时可出现中枢神经系统炎症特征样病变，此现象提示T细胞在NMO发病过程中发挥的作用不容忽视。然而，以往研究较多集中在B细胞分泌抗体及转化因素方面，对T细胞在此疾病中的作用鲜有报道。研究表明，滤泡辅助性T细胞(follicularhelper T cell,Tfh)通过促进生发中心(germinal center，GC)形成、帮助B细胞分化并产生高亲和力的抗体，从而介导体液免疫反应。Roquin蛋白是一种RNA结合蛋白，通过诱导mRNA的降解或翻译沉默，从转录后水平调节Tfh细胞的分化，进而维持体内免疫耐受和稳态。此外，哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)、信号转录和转录激活因子 3(signal transducer and activator of transcription 3,STAT3)、转录因子 1(transcription Factor 1,TCF-1)、B细胞淋巴瘤6(B cell lymphoma 6,Bcl-6)都可以调控T细胞的发育和分化，其中，Bcl-6是Tfh细胞分化必需的转录因子。有研究发现在滤泡调节性T细胞中mTOR可以通过调控其下游靶点STAT3的磷酸化进而诱导TCF-1高表达，并促进Bcl-6生成。然而，Roquin蛋白能否通过mTOR/STAT3/TCF-1轴调控Tfh细胞的分化以及与NMO的疾病进展之间的关系仍需进一步研究。<br>　　本研究以Roquin蛋白为切入点，通过检测NMO患者与健康人外周血中CD4+T细胞中Roquin、Bcl-6 mRNA相对表达量及外周血Tfh细胞的比例，分析Roquin蛋白和Tfh细胞与NMO分期和重要临床指标的关系，初步探讨Roquin蛋白和Tfh细胞在NMO发病中的作用，并在细胞水平探索Roquin蛋白对Tfh细胞的调控机制，为NMO发病机制的研究和寻找新的免疫治疗靶点提供新的思路。<br>　　方法:<br>　　纳入2023年1月至2023年12月期间于本院确诊的NMO患者35例，其中，急性期15例，缓解期20例，同时选取健康志愿者20例作为健康对照组(healthy control,HC),采集外周静脉血并分离出外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)。磁珠分选及RT-qPCR检测NMO组及健康对照组外周血CD4+T细胞中Roquin mRNA、Bcl-6 mRNA的表达水平，应用流式细胞术测定外周血中Tfh细胞所占的比例，并分析NMO组Roquin mRNA与Tfh细胞之间的相关性。分析NMO组Roquin mRNA、Tfh细胞的表达水平与扩展残疾状态量表(expanded disability status scale,EDSS)评分、脊髓病变节段及 AQP-4抗体滴度的关系。在机制方面，体外转染小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)至na?ve CD4+T细胞中干扰Roquin的表达，并加入细胞因子诱导na?ve CD4+T细胞向Tfh细胞分化，进行通路机制方面的验证。使用mTOR抑制剂处理细胞，由此分为3组:对照组、转染组、转染+雷帕霉素组。使用Western Blot检测3组Roquin、mTOR、STAT3、TCF-1及Bcl-6蛋白表达及磷酸化水平，RT-qPCR检测Bcl-6 mRNA相对表达量。采用流式细胞术测定Tfh细胞分化比例。<br>　　结果:<br>　　1.NMO患者急性期组、NMO缓解期组与HC组CD4+T细胞中Roquin mRNA 的相对表达量分别为 0.50±0.12、0.76±0.22、1.15±0.21。NMO 急性期、缓解期组中Roquin mRNA的表达水平均低于HC组(P＜0.001,P＜0.01);且急性期组的表达水平低于缓解期组(P＜0.01)。<br>　　2.NMO急性期组、NMO缓解期组与HC组外周血PBMC中Tfh细胞比例分别为（2.80±0.44）％、（1.87±0.45）％、（1.13±0.20）％。NMO 急性期、缓解期组Tfh细胞比例均明显高于HC组（P＜0.001），且急性期组显著高于缓解期组（P＜0.001）。<br>　　3.NMO患者急性期组、缓解期组的Roquin mRNA的相对表达量在长节段脊髓病变（病变节段≥3）组明显低于短节段脊髓病变（病变节段＜3）组（P＜0.01，P＜0.001）;急性期组、缓解期组的外周血中Tfh细胞的比例在长节段脊髓病变组高于短节段脊髓病组（P＜0.05）。<br>　　4.NMO患者急性期组、缓解期组的Roquin mRNA的相对表达量在中重度（EDSS评分≥3）组中均低于轻度（EDSS评分＜3）组（P＜0.05）;外周血中Tfh细胞的比例在急性期组、缓解期中重度组中均高于轻度组（P＜0.01，P＜0.05）。<br>　　5.Roquin mRNA相对表达量、Tfh细胞比例与NMO血清中的AQP4-IgG滴度均无明显关系（r=-0.177，P=0.387;r=0.276，P=0.173）。<br>　　6.NMO组中Roquin mRNA的相对表达量与外周血Tfh细胞比例之间存在负相关关系（r=-0.562,P＜0.001）。<br>　　7.NMO急性期组、NMO缓解期组与HC组CD4+T 细胞中Bcl-6 mRNA的表达量分别为1.96±0.58、1.22±0.13、0.89±0.20。NMO急性期组、缓解期组均高于HC组（P＜0.001，P＜0.05），且急性期组显著高于缓解期组（P＜0.001）。<br>　　8.体外结果显示，与对照组相比，转染组中p-mTOR/mTOR、p-STAT3/STAT3、TCF-1、Bcl-6的表达水平均增高，Tfh细胞分化比例增加;且与转染组相比，转染+雷帕霉素组中p-mTOR/mTOR、p-STAT3/STAT3、TCF-1、Bcl-6的表达水平下降，Tfh细胞分化比例降低，差异均有统计学意义。<br>　　结论:<br>　　1.外周血Tfh细胞比例可反映NMO疾病活动度和严重程度，参与NMO疾病进程。<br>　　2.Roquin蛋白具有成为监测NMO疾病活动度的生物学标志物的潜力，可能通过调控Tfh细胞增殖分化参与NMO的发生发展。<br>　　3.Roquin蛋白可能通过mTOR/STAT3/TCF-1轴抑制Bcl-6表达和Tfh细胞分化。