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摘要研究背景<br>　　食管癌是一种常见的消化道恶性肿瘤，主要分为鳞癌和腺癌两种亚型，其中鳞癌更为常见。食管鳞状细胞癌(ESCC)是全球癌症相关死亡的第六大常见原因，在2022年中国恶性肿瘤死亡谱中位居第五。其患者普遍预后较差，总体5年生存率只有15％-25％。蛋白精氨酸甲基转移酶5(PRMT5)是一种能够催化组蛋白和非组蛋白对称二甲基化的蛋白精氨酸甲基转移酶，可以通过表观遗传调控靶基因表达或信号分子的翻译后修饰来调节多种重要细胞过程。PRMT5的表达以及其甲基转移酶活性都与癌症的发生发展有关，预示着PRMT5可能是潜在的致癌基因。然而有关PRMT5在食管鳞癌发生发展进程中的分子机制研究仍相对匮乏。因此在本研究中，我们通过慢病毒制备与感染目的ESCC细胞，实现PRMT5表达的敲降，在此基础之上进行回复。并在回复的同时引入PRMT5酶失活突变体作为对照，以此来探索PRMT5对ESCC细胞各功能的影响。利用相应的RNA-seq数据进行生物信息学分析，预测其调控的信号通路以及作用靶点，探究与细胞功能对应的分子机制。为食管鳞状细胞癌的诊断、精准靶向治疗提供理论基础和新的思路。<br>　　实验方法<br>　　1)采用Pearson相关分析和Kaplan-Meier分析，整合TCGA数据库、GSE53624数据库中的食管鳞癌数据评估与临床病理参数的相关性及对患者生存的影响;2)通过RT-qPCR、蛋白免疫印迹实验(Westernblot)对食管鳞癌细胞系中PRMT5mRNA和蛋白表达情况进行检测;3)利用shRNA敲降PRMT5,并在敲降的基础上过表达PRMT5以及酶失活突变体并制作慢病毒感染细胞，得到PRMT5内源敲降、敲降后过表达野生型和酶失活突变体的稳定细胞系;4）通过细胞功能实验（MTS、Transwell、细胞划痕）检测PRMT5对食管癌细胞增殖和迁移能力的影响;5）分析RNA-seq数据，利用蛋白互作分析、KEGG信号通路分析、GO信号通路分析、RT-qPCR等手段，探究PRMT5在食管鳞癌中的下游关键靶基因以及其表观遗传调控的作用机制。<br>　　实验结果<br>　　1）PRMT5在ESCC癌组织中的表达水平高于正常食管上皮组织，且PRMT5高表达与患者不良预后密切相关。2）PRMT5促进食管鳞癌细胞EMT进程。3）在ESCC细胞系的KYSE150和KYSE180细胞中PRMT5表达水平较高。外源性PRMT5过表达促进了食管鳞癌细胞增殖、迁移，而敲降PRMT5显著抑制ESCC细胞增殖、迁移。4）蛋白精氨酸甲基转移酶活性是PRMT5调控ESCC细胞增殖、迁移所必需的。5）MBD3、AP-1、ZNF23、CDKN1A、CCND1等差异基因在食管鳞癌中表达趋势与PRMT5表达成正相关，可能是PRMT5调控的下游靶点。<br>　　研究结论<br>　　我们的研究表明PRMT5促进食管鳞癌细胞EMT进程、促进细胞增殖和迁移，PRMT5在ESCC的恶性进展及预后中发挥重要作用，提示PRMT5可作为ESCC预后的生物标志物。