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摘要目的：<br>　　（1）探究ccRCC病理标本中脂质的表达变化及不同病理分级的血脂差异。<br>　　（2）探究ccRCC中脂质代谢产物。<br>　　（3）探讨ANLN在ccRCC脂质代谢中的作用机制，为阐明ccRCC发病机制增加新的研究基础，并为临床治疗ccRCC提供新的思路。<br>　　方法：<br>　　第一部分:肾透明细胞癌临床病理特征及与脂质关系<br>　　1.1使用患者来源的病理标本进行验证<br>　　（1）观察术后肾透明细胞癌肿瘤外观形态。<br>　　（2）显微镜观察肾透明细胞癌HE染色图片。<br>　　（3）通过油红O实验及透射电镜比较癌旁组织与肾透明细胞癌组织中脂滴含量。<br>　　1.2使用患者来源的血液标本进行验证<br>　　收集1018例ccRCC患者临床资料，比较不同病理分级患者术前血脂表达差异。<br>　　第二部分:脂质代谢相关基因在ccRCC中的临床意义<br>　　2.1差异脂质代谢相关基因的获取及其功能富集<br>　　（1）TCGA及MSigDB数据库中获取得到差异脂质代谢相关基因。<br>　　（2）使用DAVID数据库分析差异基因的GO和KEGG通路。<br>　　2.2差异脂质代谢相关上调基因在ccRCC中的mRNA表达<br>　　（1）GEPIA数据库中肾透明细胞癌差异脂质代谢相关上调基因在正常及癌组织中的相对表达量比较。<br>　　（2）UALCAN数据库中肾透明细胞癌中差异脂质代谢相关上调基因在正常及癌组织中的相对表达量比较。<br>　　2.3差异脂质代谢相关上调基因在ccRCC不同细胞的表达<br>　　通过单细胞数据分析差异脂质代谢相关上调基因在不同细胞间的表达差异。<br>　　2.4差异脂质代谢相关上调基因对ccRCC预后影响<br>　　（1）GEPIA数据库分析差异脂质代谢相关上调基因在ccRCC中的K-M生存曲线。<br>　　（2）UALCAN数据库分析差异脂质代谢相关上调基因在ccRCC中的K-M生存曲线。<br>　　第三部分，脂质代谢组学在ccRCC中的应用<br>　　3.1脂质代谢产物质量控制<br>　　（1）使用多变量质量控制。<br>　　（2）样本间相关性分析。<br>　　（3）样本的主成分分析。<br>　　3.2脂质代谢物分析结果<br>　　（1）分析样本中各类代谢物的平均丰度。<br>　　（2）筛选出差异代谢物，展示潜在生物标志物。<br>　　3.3脂质代谢物通路富集<br>　　通过KEGG数据库分析代谢通路富集情况。<br>　　第四部分，ANLN调控Stat3/Plin3的机制研究<br>　　4.1ANLN在ccRCC中高表达<br>　　（1）通过bulk测序、TCGA数据库测序、TCGA中淋巴结转移、五年预后中的差异基因取交集，筛选基因。<br>　　（2）通过GEPIA及UALCAN数据库分析ANLN在ccRCC癌旁与癌组织中的表达、分期及预后。<br>　　（3）通过免疫组化分析ANLN在ccRCC癌旁与癌组织中的表达情况。<br>　　（4）通过单细胞测序分析ANLN在ccRCC不同细胞的表达情况。<br>　　（5）WB实验验证ANLN在肾小管上皮细胞及肾癌细胞系中的表达情况。<br>　　4.2ANLN基因敲低减缓ccRCC的生长和转移<br>　　（1）通过CCK8、克隆形成实验验证ANLN对增殖的影响。<br>　　（2）通过划痕实验、Transwell实验验证ANLN对转移的影响。<br>　　（3）通过裸鼠成瘤实验验证ANLN对肿瘤形成的影响。<br>　　4.3ANLN通过Stat3/Plin3通路促进脂滴形成<br>　　（1）通过GSEA富集ANLN相关下游通路。<br>　　（2）应用Stat3激活剂Colivelin,通过Western blot实验检测Stat3在ANLN调控Plin3中的作用。<br>　　（3）通过油红O染色及透射电镜验证Stat3激活剂对脂滴形成的影响。<br>　　结果：<br>　　第一部分:肾透明细胞癌临床病理特征及与脂质关系<br>　　1.1使用患者来源的病理标本进行验证<br>　　（1）通过术后肾透明细胞癌大体形态观察，发现肿瘤切面黄白色，初步判断脂肪成分可能参与肿瘤发生过程。<br>　　（2）HE染色图片显示癌细胞胞浆中含有大量脂质空泡。<br>　　（3）通过油红O实验及透射电镜发现肾透明细胞癌组织中脂滴含量较癌旁组织明显增多。<br>　　1.2使用患者来源的血液标本进行验证<br>　　收集1018例ccRCC患者临床资料，发现Ⅲ+Ⅳ级肾透明细胞癌患者术前血甘油三酯、总胆固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白含量明显低于Ⅰ+Ⅱ级。<br>　　第二部分:脂质代谢相关基因在ccRCC中的临床意义<br>　　2.1差异脂质代谢相关基因的获取及其功能富集<br>　　（1）TCGA及MSigDB数据库取交集得到差异脂质代谢相关基因255个。<br>　　（2）通过GO和KEGG通路富集到脂肪酸代谢及甘油磷脂代谢。<br>　　2.2差异脂质代谢相关上调基因在ccRCC中的mRNA表达<br>　　（1）GEPIA数据库显示FABP7、FABP6、ANGPTL4、HILPDA、CYP2J2、SCD、ENO2在肾透明细胞癌组织中的相对基因表达量明显高于正常组织，ALOX15B、PLA2G2D、PIK3R6与正常组织无明显差异。<br>　　（2）ULCAN数据库显示FABP7、FABP6、ANGPTL4、HILPDA、CYP2J2、ALOX15B、SCD、PLA2G2D、PIK3R6、ENO2相对基因表达量均明显高于正常组织。<br>　　2.3差异脂质代谢相关上调基因在肾透明细胞癌组织不同细胞的表达<br>　　通过单细胞数据分析差异脂质代谢相关上调基因发现FABP7、FABP6、ANGPTL4、HILPDA、CYP2J2在癌细胞中表达明显，ENO2除了在癌细胞高表达外，在免疫细胞中也表达较高。<br>　　2.4差异脂质代谢相关上调基因对ccRCC预后影响<br>　　CYP2J2、ENO2在GEPIA及UALCAN数据库中均有统计学意义，其中CYP2J2高表达患者预后较好，ENO2高表达患者预后较差。<br>　　第三部分，脂质代谢组学在ccRCC中的应用<br>　　3.1脂质代谢产物质量控制<br>　　质量控制结果显示样本中所含代谢物检测结果稳定。<br>　　3.2脂质代谢物分析结果<br>　　（1）代谢物结果显示癌与癌旁两组之间磷脂酰胆碱（PE）、磷脂酰乙醇胺（PC）、甘油三酯（TG）、鞘磷脂（SM）、溶血磷脂酰乙醇胺（LPE）、己糖基神经酰胺（HexCer）、神经酰胺（Cer）之间有统计学差异。<br>　　（2）筛选出134个差异代谢物，可能是潜在生物标志物。<br>　　3.3脂质代谢物的通路富集<br>　　KEGG数据库分析发现通路集中在甘油磷脂、醚脂质代谢、鞘脂类代谢、糖基磷脂酰肌醇的生物合成、甘油脂类、肌醇磷酸酯、亚油酸、亚麻酸等代谢通路。<br>　　第四部分，ANLN调控Stat3/Plin3的机制研究<br>　　4.1ANLN在ccRCC中高表达<br>　　（1）通过bulk测序、TCGA数据库测序、TCGA中淋巴结转移、五年预后中的差异基因取交集，筛选得到68个基因，ANLN排名第一位。<br>　　（2）通过GEPIA及UALCAN数据库分析ANLN在ccRCC在癌组织中高表达，与分期及预后有关。<br>　　（3）免疫组化结果显示ANLN在ccRCC癌组织中高表达。<br>　　（4）单细胞测序显示ANLN在ccRCC细胞中高表达。<br>　　（5）WB实验证实ANLN在肾癌细胞系中高表达。<br>　　4.2ANLN基因敲低减缓ccRCC的生长和转移<br>　　（1）CCK8、克隆形成实验证实敲低ANLN抑制ccRCC细胞增殖。<br>　　（2）划痕实验、Transwell实验实敲低ANLN抑制ccRCC细胞迁移、侵袭、EMT。<br>　　（3）裸鼠成瘤实验证实敲低ANLN降低皮下瘤体积。<br>　　4.3ANLN通过Stat3/Plin3通路促进脂滴形成<br>　　（1）通过GSEA富集ANLN下游通路JAK/STAT和脂肪酸代谢。<br>　　（2）应用Stat3激活剂Colivelin,通过Western blot实验证实Plin3的表达得到部分回复。<br>　　（3）通过油红O染色及透射电镜验证Stat3激活剂促进脂滴形成。<br>　　结论：<br>　　（1）脂质代谢参与肾透明细胞癌发生发展。<br>　　（2）敲低ANLN影响肾透明细胞癌细胞增殖、侵袭、迁移、EMT。<br>　　（3）ANLN通过激活Stat3/Plin3通路促进脂滴形成，进而导致肿瘤进展。