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摘要目的:<br>　　帕金森病(Parkinson''s disease,PD)的发病机制及药物作用靶点的探究是生物医学领域的难题。近年研究表明，多巴胺能神经元铁死亡与PD的发生发展极其相关。而硫氧还蛋白(Recombinant Thioredoxin Reductase 1，TrxR1)参与氧化应激及铁死亡的调控，是铁死亡的潜在作用靶标。前期实验发现抑制磷酸二酯酶4(phosphodiesterase4，PDE4)可以减轻氧化应激，保护多巴胺能神经元，但PDE4是否参与PD过程中的神经元铁死亡，以及TrxR1是否参与PDE4对铁死亡的调控尚有待探究。因此，本课题将通过抑制或敲低PDE4探究其在PD中对铁死亡的作用，并在此基础上探究其与TrxR1的关联。<br>　　方法:<br>　　(1)在MN9D细胞中构建鱼藤酮与Erastin模型，利用MTT、LDH等方法检测不同死亡抑制剂以及PDE4抑制剂Roflupram(ROF)对细胞活力的改善作用;通过MDA检测、GSH检测、脂质过氧化探针、CellRox探针、亚铁离子探针、Western Blot检测等方式，探究PDE4抑制后铁死亡相关指标的变通过敲低PDE4A，采用免疫荧光、脂质过氧化探针等技术探究PDE4A对细胞活力及细胞铁死亡的作用。通过MTT检测、脂质过氧化检测等方法探究敲低TrxR1对于PDE4抑制后的作用。<br>　　(2)采用鱼藤酮刺激C57BL/6J小鼠建立帕金森疾病模型，通过运动功能评分及旷场实验考察PDE4抑制剂ROF对运动功能的影响;采用Western Blot检测纹状体中铁死亡相关蛋白水平的变化。<br>　　结果:<br>　　(1)鱼藤酮可导致细胞内Fe2+水平增加，给予铁死亡抑制剂可以减少鱼藤酮引起的细胞死亡。<br>　　(2)ROF可剂量依赖性地提高MN9D细胞活力，减少鱼藤酮和Erastin诱导的LDH释放。ROF可降低鱼藤酮及Erastin模型下MN9D细胞MDA及脂质过氧化水平、提高线粒体膜电位及GSH水平。同时，ROF能降低鱼藤酮造模条件下铁死亡蛋白ACSL4的表达及提高GPX4的水平。<br>　　(3)敲低PDE4A可减少Erastin诱导的Fe2+及脂质过氧化水平的升高，对抗鱼藤酮及Erastin引起的细胞活力水平、线粒体膜电位的降低，并改善铁死亡相关蛋白的表达。<br>　　(4)敲低TrxR1可减弱ROF在鱼藤酮模型中改善细胞活力、缓解脂质过氧化的保护作用，同时敲低TrxR1可以降低GPX4的表达。<br>　　(5)在鱼藤酮模型中，ROF可改善C57BL/6J小鼠在旷场中运动表现，提高帕金森震颤麻痹评分及爬梯实验运动功能评分。ROF可降低纹状体ACSL4表达，上调GPX4的蛋白水平。<br>　　结论:<br>　　抑制PDE4可对抗鱼藤酮诱导的多巴能神经元铁死亡，减少鱼藤酮导致的小鼠运动功能障碍。其作用可能是通过PDE4A亚基的参与，并上调TrxR1的表达，从而减少Fe2+及脂质过氧化物蓄积，缓解神经元铁死亡。