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摘要目的:<br>　　威尔逊氏症（Wilson''s discase,WD）是一种常染色体隐性单基因遗传病，由ATP7B基因突变所致。ATP7B基因突变及其功能失活，影响了铜在胆汁中的排出，从而诱发了铜在体内的稳态紊乱，对肝、脑等脏器造成了疾病的理性损害。目前，使用铜螯合剂治疗是常用于临床一线的治疗方法，但该类药物的不良反应均较为常见，临床应用受到限制。目前基因治疗已成为针对单基因遗传病最有发展前景的治疗方法之一。氟化阳离子聚合物在体外和体内递送显示出优异的转染效率。因此，本论文旨在探究氟化阳离子聚合物/ATP7B DNA复合物体外恢复铜诱导的细胞损伤的功能活性情况，为WD疾病基因治疗奠定基础。<br>　　方法:<br>　　1.使用“A2+B4+C2”迈克尔加成法合成了氟化阳离子聚合物（FCPs），通过凝胶渗透色谱（GPC）和核磁共振（NMR）测量对FCPs进行化学结构表征，Picogreen法测定聚合物的DNA结合亲和力，进一步表征FCPs与DNA形成的复合物纳米粒子的粒径、电位和微观形貌，评价FCPs的性能;<br>　　2.通过免疫荧光显微镜和流式胞术定性定量检测FCPs介导GFP质粒的转染效果，使用酶标仪检测其介导荧光素酶质粒的转染效果，使用AlamarBlue阿尔玛蓝检测转染后的细胞毒性，系统评价FCPs的转染性能;<br>　　3.RT-qPCR和Western Blot验证不同时间点ATP7B的外源性表达;<br>　　4.构建铜过载细胞模型，通过检测细胞活性和细胞内铜含量，并检测细胞损伤的氧化应激指标，评价外源性ATP7B的生理活性。<br>　　结果:<br>　　1.本文合成了两种化学组成的氟化阳离子聚合物FCP-1和FCP-2，对它们进行表征发现，两种FCPs在聚合过程中，GPC曲线显示没有凝胶化，NMR显示封端成功。接着，在不同的聚合物/DNA质量比（w/w）下，FCPs在20∶1，40∶1，60∶1时均表现出极强的DNA结合亲和力。在40∶1和60∶1时显示出小尺寸，高zeta电位。尤其是在60∶1时，TEM显示FCPs为紧凑的球形形态。<br>　　2.设置10个不同的聚合物/DNA的w/w,在293T细胞上验证FCPs的转染效率。免疫荧光定性和流式细胞术定量实验均发现FCP-1的10个w/w的转染效率均高于FCP-2。继而在多种肝癌细胞上验证FCP-1的转染效率，与商业化转染试剂相比，发现FCP-1在40∶1到60∶1时显示出优秀的转染效率，并保持细胞良好的活性。<br>　　3.在WD疾病细胞模型CHO细胞上转染外源性ATP7B,RT-PCR和Western Blot结果发现在三个时间点(24,48,72h)中，ATP7B mRNA和蛋白的表达在48h最高。<br>　　4.不同浓度的含铜培养液孵育细胞后，相比于未转染ATP7B组，转染ATP7B组增加了细胞活性和减少细胞内铜含量。且ROS，GSH和MDA三个氧化应激指标在转染ATP7B后相应的细胞损伤情况也得到明显改善。<br>　　结论:<br>　　氟化阳离子聚合物FCP-1在多种肝癌细胞上显示出优异的转染效率，且保持良好的基因转染后细胞活性。FCP-1高效递送ATP7B基因，并保持ATP7B的生理活性功能。本研究为ATP7B基因治疗WD病提供了实验依据和候选递送系统，后续需要在动物模型上进一步验证治疗效果和安全性。