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摘要目的:肠道病毒A组71型和柯萨奇病毒A组16型是导致手足口流行的主要病原体，然而近年来，随着手足口病监测体系的持续优化，我们发现柯萨奇病毒A组6型和柯萨奇病毒A组10型正成为引起手足口病的新流行毒株。肠道病毒致病病原谱的改变对手足口病多价疫苗的研发提出了新挑战。然而在肠道病毒多价疫苗的研究中，一个潜在的问题是针对不同肠道病毒抗原的预存免疫对后续同类疫苗免疫可能存在干扰。本课题组先前关于EV71灭活疫苗免疫研究中发现EV71疫苗免疫后的CA16病毒感染不会干扰EV71灭活疫苗在恒河猴体内诱导的特异性免疫应答。但是，随着肠道病毒多价疫苗抗原组分的不断引入，EV71与CA10之间是否存在免疫干扰作用，或者EV71和CA16两种抗原同时存在时是否影响CA10的抗原免疫效果是值得我们进一步研究的问题，也是未来研发EV71/CA16/CA10、EV71/CA16/CA10/CA6等联合疫苗的理论基础。因此，本研究继续探讨了 EV71抗原和EV71/CA16双价抗原预存免疫对CA10抗原诱导的免疫应答的影响。<br>　　方法:首先，CA10病毒体外感染Vero细胞、16HBE细胞和FHC细胞，通过观察三种细胞被CA10感染后的细胞病变效应,检测感染性病毒滴度和病毒基因拷贝数,分析CA10在三种细胞上的增殖动力学特征。随后，我们制备了 EV71、CA16、CA10单组分疫苗，以及EV71/CA16双价联合疫苗。将成年BALB/c小鼠，随机分为EV71-CA10预存免疫组（先进行两剂EV71疫苗的接种，再进行两剂CA10疫苗的接种）、EV71/CA16-CA10预存免疫组（先进行两剂EV71/CA16双价联合疫苗的接种，再进行两剂CA10疫苗的接种）和CA10单苗对照组、EV71单苗对照组、CA16单苗对照组。采用肌肉注射小鼠的方法进行免疫，并在每剂次实验性疫苗接种后14天收集小鼠的外周血和脾脏组织。分离小鼠血清，进行中和抗体试验检测小鼠中和抗体水平;ELISA实验检测小鼠血清抗体亚型。使用小鼠脾脏淋巴细胞进行ELISpot实验检测T细胞特异性免疫功能。<br>　　结果:CA10病毒能够感染Vero细胞、16HBE细胞、FHC细胞，感染后均可以引起细胞形态出现肿胀皱缩、变圆脱落的细胞病变效应;且CA10在三种细胞中均可以增殖，特别是在Vero细胞和16HBE细胞中能够较快达到增殖高峰。预存免疫组EV71疫苗和EV71/CA16双价联合疫苗在两剂免疫完成后，中和抗体试验结果发现两组预存免疫组小鼠体内均能够诱导产生良好的EV71、CA16中和抗体水平，与EV71、CA16单苗对照组中和抗体水平相比差异无统计学意义。随后进行CA10抗原的接种，两剂免疫完成后发现，EV71-CA10预存免疫组和EV71/CA16-CA10预存免疫组中EV71或者EV71/CA16抗原的预先接种不影响CA10诱导的中和抗体水平;同时进行EV71和CA16中和抗体水平的检测发现，CA10抗原免疫完成后，两组预存免疫组中EV71和CA16中和抗体水平与EV71、CA16单苗对照组相比，差异均无统计学意义;与CA10抗原免疫前的EV71或者CA16抗原诱导的中和抗体水平相比，差异也无统计学意义。ELISA实验检测发现预存免疫组和单苗抗原组抗原诱导的抗体亚型均偏向于IgG2b;EV71和EV71/CA16抗原预存免疫不影响CA10抗原对IgG2b抗体诱导的偏向性;CA10抗原免疫完成后，也不影响先前EV71抗原和EV71/CA16抗原对IgG2b抗体类别的偏向性。ELISpot实验发现预存免疫组EV71疫苗和EV71/CA16联合疫苗组在两剂免疫完成后，均能够诱导产生EV71、CA16特异性IFN-γ和IL-4细胞因子分泌，与EV71、CA16单苗对照组相比无统计学差异。在完成两剂CA10抗原接种后,EV71-CA10预存免疫组和EV71/CA16-CA10预存免疫组不影响CA10诱导的特异性IFN-γ和IL-4细胞因子分泌水平;且与EV71、CA16单苗对照组相比，两剂CA10抗原免疫后不影响两组预存免疫组中EV71和CA16诱导的特异性IFN-γ和IL-4细胞因子分泌水平;CA10抗原免疫前后，均不影响EV71或CA16抗原诱导的特异性IFN-γ和IL-4细胞因子分泌水平。<br>　　结论:EV71或CA16抗原预存免疫对于CA10抗原诱导的体液免疫和细胞免疫应答没有影响，且CA10免疫后对先前EV71疫苗接种或EV71/CA16疫苗接种诱导的免疫应答不产生干扰。