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摘要第一部分整合多组学数据构建代谢途径相关的新型子宫内膜癌分子分型<br>　　目的:本研究利用多组学数据探索子宫内膜癌(Endometrial cancer，EC)在发生过程中是否发生代谢重塑，并构建以代谢通路为基础的新型分子分型，明确其与肿瘤生物学行为、内在基因组学特征及免疫微环境的关系，进而指导临床精准治疗。<br>　　方法:1.研究纳入来自公共数据库的EC转录组学、蛋白组学及基因组学数据;2.基于代谢基因表达水平，利用主成分分析探索EC与正常组织之间的代谢改变;3.利用基因集变异分析(Gene Set Variation Analysis，GSVA)计算EC患者所有代谢通路的富集分数，之后通过多种无监督聚类分析构建以代谢通路为基础的新型分子分型(Metabolism Pathway-based Subgroups,MPS);4.比较 EC 不同 MPS 分型之间临床病理特征、分子生物学功能、基因组学改变及免疫微环境间的差异。<br>　　结果:1.多组学分析揭示相较于正常组织，EC在发生过程中存在代谢重编程，大部分代谢通路被显著激活;2.EC组织内部存在代谢异质性，基于代谢通路改变被划分为三个分子亚组(MPS1 35.9％;MPS2 33.4％;MPS330.7％);3.EC不同MPS分组之间存在显著不同的临床病理特征，MPS2亚型预后最好，MPS3亚型预后最差，MPS1亚型预后介于两者之间;MPS3亚型以晚期、低分化、TP53分子亚型为主;4.相较于MPS2亚型，MPS1及MPS3亚型中与细胞增殖相关的分子通路显著激活，而MPS2亚型参与上皮间质转化的基因表达水平更高;5.EC MPS亚型之间具有完全不一致的基因突变图谱，MPS1亚型以PI3K通路及参与赖氨酸代谢的基因突变为特征，MPS3亚型以TP53突变为特征，且其基因组不稳定性及同源重组缺陷分数最高;6.EC MPS亚型之间免疫微环境存在异质性，MPS2亚型肿瘤浸润T细胞水平高，但免疫失调分数更高;MPS1亚型肿瘤突变负荷高，且计算得到的肿瘤免疫功能障碍和排斥分数低;MPS3亚型免疫细胞浸润水平最低。<br>　　结论:EC在发生发展的过程中存在代谢重编程，且其内部存在代谢异质性。基于代谢通路构建的新型分子分型具有显著的预后指示意义，不同分型间代谢特点、肿瘤生物学特征、基因组特征和免疫微环境明显不同，可以指导临床精准治疗。<br>　　第二部分肿瘤有氧糖酵解来源的乳酸诱导肿瘤相关巨噬细胞发生M2极化促进EC进展<br>　　目的:探讨EC有氧糖酵解与肿瘤相关巨噬细胞(Tumor associated macrophages,TAM)表型重塑的关系，分析TAM在EC进展发挥作用的分子机制。<br>　　方法:1.研究利用生信分析、细胞外乳酸水平检测、实时荧光定量逆转录PCR(Quantitative Real-time PCR,RT-PCR)和免疫组化(Immunohistochemistry,IHC)探讨EC有氧糖酵解通路整体的激活情况和临床病理因素间的关系;2.通过生信分析和免疫荧光(Immunofluorescence，IF)比较TAM在EC和正常内膜组织间的浸润水平;3.利用流式细胞术和IHC探讨M2 TAM与临床病理因素的关系;4.外源性乳酸刺激THP1细胞来源M0巨噬细胞后，利用流式细胞学鉴定M2巨噬细胞的比例;5.EC细胞系与THP1细胞来源M0巨噬细胞共培养后，观察LDHA抑制剂预处理阻断有氧糖酵解，另外反向添加外源性乳酸，观察不同共培养组M2巨噬细胞比例的变化;6.利用细胞划痕实验探究M2巨噬细胞对EC细胞迁移能力的影响;7.利用小室侵袭实验探究M2巨噬细胞对EC细胞侵袭能力的影响;同时利用IF、RT-PCR检测M2巨噬细胞来源CM刺激下EC细胞上皮间质转化(Epithelial-Mesenchymal Transition,EMT)能力的变化;8.利用M2巨噬细胞来源CM培养人脐血管上皮细胞，同时利用生信分析比较不同M2巨噬细胞浸润水平下血管形成通路激活情况，探究其对血管形成能力的影响。<br>　　结果:1.相较于正常组织，糖酵解通路富集分数在EC中显著升高，参与糖酵解的关键酶在EC组织和细胞系中显著上调，并且与更高的临床分期及更差的组织学分级呈正相关;Kaplan-Meier(KM)生存曲线揭示HK2和SCL16A1高表达患者预后更差，无进展生存期更短(P＜0.05);功能水平上，EC细胞系细胞外乳酸水平远高于人原代内膜上皮细胞。2.生信分析揭示EC组织中CD68和CD163基因表达量及巨噬细胞浸润水平远高于正常子宫内膜(P＜0.05);流式分析显示在EC组织中CD206阳性M2型巨噬细胞含量与肿瘤分期正相关;免疫组化分析表明存在深肌层浸润的EC组织中CD206阳性M2型巨噬细胞含量更高;3.外源性乳酸刺激THP1来源巨噬细胞以时间、浓度依赖性的方式发生M2极化;EC细胞与M0巨噬细胞共培养后诱导其发生M2极化，阻断LDHA后，极化的M2比例显著降低;4.经M2巨噬细胞来源条件培养基(Conditioned media,CM)刺激后，细胞划痕实验表明EC细胞系迁移能力增强;穿过基质胶小室的EC细胞数量更多，表明其侵袭能力增强;RT-PCR及IF证实参与EMT的关键蛋白，N-cadherin、Vimentin及Slug显著上调;5.生信分析显示巨噬细胞浸润水平高的EC患者血管形成分数更高，同时经M2巨噬细胞CM培养HUVEC细胞后，诱导生成更多的血管结构。<br>　　结论:1.EC糖酵解通路显著激活，并与预后不良临床病理因素呈正相关;2.EC组织内M2 TAM数量与肌层浸润及临床分期呈正相关;3.EC激活糖酵解通路，分泌过量乳酸至肿瘤微环境中，诱导TAM发生M2极化;4.M2TAM诱导EC细胞发生EMT,增强其迁移及侵袭能力，且促进肿瘤局部新生血管生成。